概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现的敲除,纯合:外显子7中的10bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约255450 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 Amelogenin X、Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8、11 D16S539:11、12 vWA:14个 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 泛素编辑酶,包含泛素连接酶和泛素酶活性。 泛素编辑蛋白复合物的基本成分,也包括RNF11、ITCH和TAX1BP1,确保炎症信号通路的瞬时性。 在TNF刺激下,氘化RIPK1上的“Lys-63”-多泛素链,并催化“Lys-48”-多泛素链的形成。 这导致RIPK1蛋白酶体降解,从而终止TNF-或LPS-介导的NF-kappa-B活化。体外能够氘化“Lys-48”和“Lys-63”多泛素链。 程序性细胞死亡抑制剂。 在淋巴系统的功能中起作用。 -
序列相似性 属于肽酶C64家族。 包含7个A20型锌指。 包含1个OTU域。 -
域 A20型锌指介导泛素连接酶活性。 OTU结构域介导氘激酶活性。 -
手机定位 细胞质。 核心。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗TNFAIP3抗体[EPR2663]( 约92324 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: TNFAIP3敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道3: 用5ng/ml PMA处理Jurkat(外周血T细胞白血病细胞系)细胞48小时,然后用2µg/ml PHA处理48小时,全细胞裂解 车道4: 未经处理的Jurkat(外周血T细胞白血病细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 89千Da 观察到的频带大小: 80千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab92324年 在80 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约92324 在野生型A549细胞中,抗TNFAIP3抗体[EPR2663]显示与TNFAIP3.特异性反应。 敲除细胞系ab266945(敲除细胞裂解物 ab257113号 )已使用。 对野生型和TNFAIP3基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab92324年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000稀释度和1/2000稀释度在4°C下孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第7外显子10 bp缺失
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载