概述
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产品名称 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 A431型 -
有机体 人类 -
突变描述 CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=13 bp缺失; 帧偏移=99.9% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 下一代测序(NGS),Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
笔记 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权的必要性,以供其预期用途。 本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经过测试的应用程序
属性
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储存说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab280456-人KRT14敲除A431细胞裂解物 1 x 100微克 ab263973-人类野生型A-431细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 表皮样癌 -
性别 女性
目标
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功能 非螺旋尾结构域参与促进KRT5-KRT14长丝自组织成大束,并增强体外角蛋白中间长丝弹性的机械性能。 -
组织特异性 在基底层中检测到,在更顶部的层中较低,特别是在棘层、颗粒层中,但在角质层中未检测到。 在生长卵泡的外根鞘中强烈表达,但在萌发基质、内根鞘或毛发中不表达。 在休止期的毛发周围的角质形成细胞中发现。 -
参与疾病 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症(DM-EBS)的病因[MIM:131760]。 DM-EBS是一种严重的表皮内大疱性表皮松解症,其特征是全身疱疹样水疱、粟粒形成、指甲营养不良和粘膜受累。 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症Weber-Cockayne型(WC-EBS)的病因[MIM:131800]。 WC-EBS是一种表皮内大疱性表皮松解症,其特征是仅限于手掌和足底皮肤区域出现水疱。 KRT14缺陷是单纯性大疱性表皮松解症Koebner型(K-EBS)的病因[MIM:131900]。 K-EBS是一种以全身性皮肤起泡为特征的表皮内大疱性表皮松解症。该表型与Dowling-Meara型没有根本区别,尽管其严重程度较轻。 KRT14缺陷是单纯性常染色体隐性遗传性大疱性表皮松解症(AREBS)的原因[MIM:601001]。 AREBS是一种表皮内大疱性表皮松解症,其特征是足部背面、侧面和足底表面出现局部起泡。 KRT14缺陷是内格列夫兰切什蒂-贾达松综合征(NFJS)的病因[MIM:161000]; 也称为Naegeli综合征。 NFJS是一种罕见的常染色体显性外胚层发育不良。 主要特征是没有皮纹(指纹)、网状皮肤色素沉着(大约从2岁开始,之前没有炎症阶段)、掌跖角化病、汗腺功能减退的少汗症和热引起的不适、指甲营养不良和牙釉质缺损。 KRT14缺陷是网状色素性皮肤病(DPR)的原因[MIM:125595]。 DPR是一种罕见的外胚层发育不良,其特征是终身持续的网状色素沉着过度、非连锁性脱发和指甲营养不良。 -
序列相似性 属于中间丝族。 -
手机定位 细胞质。 核心。 在两者中都表现为丝状图案。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 对照14 CK-14型 细胞角蛋白14
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KO细胞系 -
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应用
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图像
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车道1: 野生型A431细胞裂解物20 ug 车道2: KRT14敲除A431细胞裂解物20 ug 3号车道: 人皮肤细胞裂解物20 ug 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约51054 在49 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。
第51054页 western blot显示与野生型A-431细胞中的细胞角蛋白14反应KRT14敲除细胞系时观察到信号丢失 约261897 使用敲除细胞裂解物ab261706。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约51054 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道2: KRT14敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 3号车道: 人皮肤全组织裂解物20 ug 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元197893年 在52 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。
公元197893年 Western blot显示与野生型A-431细胞中的KRT14发生反应。KRT14敲除细胞系出现信号丢失 约261897 使用敲除细胞裂解物ab261706。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 公元197893年 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/50000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道2: KRT14敲除物A-431(人表皮样癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 3号车道: 人皮肤全组织裂解物20 ug 车道4: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约119695 在52 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在37kDa处观察到。
约119695 Western blot显示与野生型A-431细胞中的KRT14发生反应。KRT14敲除细胞系出现信号丢失 约261897 使用敲除细胞裂解物ab261706。 对野生型A-431和KRT14敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab119695年 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1:93和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
CRISPR/Cas9实现的淘汰; X=13 bp缺失; 帧移位=99.9%
协议
数据表和文件
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