概述
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产品名称 人ASS1敲除HeLa细胞裂解物 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9,在外显子3中插入1 bp,并在外显字3中插入选择盒实现敲除。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
笔记 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经过测试的应用程序
属性
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储存说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab260139-人ASS1敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255552-人类野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
目标
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通路 氨基酸生物合成; L-精氨酸生物合成; 从L-鸟氨酸和氨甲酰磷酸盐中提取L-精氨酸:步骤2/3。 氮代谢; 尿素循环; 从L-天冬氨酸和L-瓜氨酸中提取的(N(omega)-L-精氨酸)琥珀酸:步骤1/1。 -
参与疾病 ASS1缺陷是1型瓜氨酸血症(CTLN1)的原因[MIM:215700]。 瓜氨酸血症属于尿素循环障碍。 这是一种常染色体隐性遗传疾病,主要以血清和尿液瓜氨酸水平升高为特征。 氨中毒是另一种表现。 CTLN1通常在出生后的头几天出现。 受影响的婴儿出生时看起来很正常,但随着体内氨的积累,他们会出现嗜睡、进食不良、呕吐、癫痫发作和意识丧失等症状。 较温和的CTLN1型可在儿童或成人后期发展,但这种情况并不常见。 -
序列相似性 属于精氨琥珀酸合成酶家族。 类型1子家族。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 精氨酸琥珀酸合酶 精氨酸琥珀酸合成酶1 精氨酸琥珀酸合成酶1
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应用
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图像
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车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: ASS1敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约170952 在47 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约170952 western blot显示,抗-ASS1抗体[EPR12398]与野生型HeLa细胞中的ASS1特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab264989年 使用敲除细胞裂解物ab257143。 对野生型和ASS1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约170952 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4点孵育过夜 ° C分别为1000稀释度和20000稀释度的1。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: ASS1敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约170900 在47 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约170900 western blot显示,抗-ASS1抗体[EPR12399(B)]-C末端与野生型HeLa细胞中的ASS1特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab264989年 使用敲除细胞裂解物ab257143。 对野生型和ASS1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约170900 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4点孵育过夜 ° C分别为1000稀释度和20000稀释度的1。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因-1:1 bp插入外显子3 -
等位基因-2:在外显子3中插入选择盒
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载