概述
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产品名称 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9,在外显子2中插入1bp和在外显子2中插入选择盒来实现敲除。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
注意事项 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 重构后,短期储存在-20°C下,长期储存在-80°C下。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经过测试的应用程序
属性
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储存说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab261925-人ICAM1敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255552-人类野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12,13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
目标
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功能 ICAM蛋白是白细胞粘附蛋白LFA-1(整合素α-L/β-2)的配体。 在白细胞跨内皮细胞迁移过程中,ICAM1的参与通过ARHGEF26/SGEF和RHOG的激活促进内皮细胞心尖杯的组装。 在鼻病毒感染的情况下,充当病毒的细胞受体。 -
序列相似性 属于免疫球蛋白超家族。 ICAM系列。 包含5个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 -
翻译后 修改 单泛素化,由MARCH9促进并导致内吞作用。 -
手机定位 膜。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 单克隆抗体BB2鉴定的抗原 BB 2号机组 英国广播公司2
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KO细胞系 -
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应用
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图像
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车道1: 野生型HeLa细胞裂解物20μg 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物20μg 3号车道: A549细胞裂解液20μg 车道4: Ramos细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:抗ICAM1抗体[EP1442Y]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约53013 显示与ICAM1特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解液中在90 kDa时观察到一条带(该抗体未观察到),在Icam1敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约261742 (敲除细胞裂解物ab256947)。 在低于90kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表ICAM1的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和Icam1敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物20μg 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物20μg 3号车道: A549细胞裂解液20μg 车道4: Ramos细胞裂解液20μg Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗ICAM1抗体[EPR4776]染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 澳大利亚银行109361 显示与ICAM1特异结合。 在野生型HeLa细胞裂解物中观察到90kDa的条带,而在Icam1敲除细胞系中没有观察到该大小的信号 约261742 (敲除细胞裂解物ab256947)。 在低于90kDa的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表ICAM1的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和Icam1敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
阻隔和稀释缓冲液和浓度:截留 ® (TBS)用等体积0.1%TBS稀释的阻塞缓冲液 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: Ramos细胞裂解物 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约282575 在90kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约282575 Western blot显示,抗ICAM1抗体[EPR24639-3]与野生型Hela细胞中的ICAM1反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约261742 使用敲除细胞裂解物ab256947。 对野生型和ICAM1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab282575年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4点孵化 o(o) C隔夜,稀释度分别为1000分之一和20000分之一。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20 ug) 车道2: ICAM1敲除HeLa细胞裂解物(20 ug) 3号车道: Raji细胞裂解物(20 ug) 车道4: Ramos细胞裂解物(20 ug) 约53013 在野生型HeLa细胞中显示与ICAM1特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约261742 使用敲除细胞裂解物ab256947。 对野生型和ICAM1敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约53013 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4点孵育过夜 o(o) C分别为1000稀释度和20000稀释度的1。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:选择盒插入外显子2 -
等位基因2:1 bp插入外显子2
协议
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载