主要功能和细节
检测类型:半定量 检测方法:比色法 平台:缩微板阅读器 分析时间:3小时30分钟 样品类型:核提取物
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
样品类型 核提取物 -
化验类型 半定量 -
化验时间 3小时 3000万 -
物种反应性 与以下物质反应: 小鼠、大鼠、人类 -
产品概述 NFkB p65转录因子检测试剂盒ab133112是一种基于ELISA的非放射性敏感方法,用于检测核提取物中的特异转录因子DNA结合活性。
在NFkB p65分析中,含有NFkB反应元件的双链DNA序列被固定在96-well板孔的底部。 核提取物中包含的NFkB与NFkB反应元件结合,并使用抗NFkB p65抗体进行检测。 添加与HRP结合的二级抗体以在450 nm处提供比色读数。
NFkB p65转录因子检测方案总结: -从细胞中制备核提取物 -向井中添加样本 -孵育1小时或o/n -用洗涤缓冲液洗涤 -加入NFkB抗体并孵育1小时,然后洗涤 -添加HRP结合二级抗体并孵育1小时,然后清洗 -加入展开液,孵育15-45分钟 -添加停止解决方案 -用微孔板阅读器分析 -
站台 缩微板阅读器
属性
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储存说明 请参阅协议。 -
组件 96次测试 96-井盖 1台 聚山梨酯20 1瓶 转录因子抗体结合缓冲液(10X) 1 x 3毫升 转录因子结合检测缓冲液(4X) 1 x 3毫升 转录因子开发液 1 x 12毫升 转录因子山羊抗狂犬病HRP结合物 1 x 100µl 转录因子NFkB(人p65)阳性对照 1瓶 转录因子NFkB(p65)一抗 1瓶 转录因子NF-kB 96-微孔板 1台 转录因子NFkB竞争物dsDNA 1瓶 转录因子试剂A 1 x 120微升 转录因子停止溶液 1 x 12毫升 洗涤缓冲液浓缩液(400X) 1 x 5毫升 -
研究领域 -
功能 NF-kappa-B是一种多效性转录因子,存在于几乎所有细胞类型中,参与炎症、免疫、分化、细胞生长、肿瘤发生和凋亡等多种生物过程。 NF-kappa-B是由类Rel结构域蛋白RELA/p65、RELB、NFKB1/p105、NFKB1/p50、Rel和NFKB2/p52形成的同二聚体或异二聚体复合物,其中异二聚物p65-p50复合物最为丰富。 二聚体结合在其靶基因DNA中的kappa-B位点,并且单个二聚体对不同的kappa-B位点有不同的偏好,它们可以以不同的亲和力和特异性结合。 不同的二聚体组合分别作为转录激活因子或阻遏因子。 NF-kappa-B受翻译后修饰和亚细胞分隔的各种机制以及与其他辅因子或辅抑制因子的相互作用控制。 NF-kappa-B复合物被保存在细胞质中,处于与NF-kampa-B抑制剂家族成员复合的非活性状态。 在传统的激活途径中,IκB被IκB激酶(IKKs)磷酸化以响应不同的激活剂,随后被降解,从而释放出转移到细胞核的活性NF-κ-B复合物。 NF-kappa-B异二聚体p65-p50和p65-c-Rel复合物是转录激活物。 NF-kappa-B p65-p65复合物似乎参与了侵袭素介导的IL-8表达激活。 I-κB对NF-κB的抑制作用主要通过与p65的相互作用发挥。 p65显示一个弱的DNA结合位点,该位点可能直接参与NF-kappa-B复合体中的DNA结合。 通过与DDX1的关联与NF-kappa-B启动子区域的染色质关联。 -
序列相似性 包含1个RHD(Rel-like)域。 -
域 9aaTAD基序是存在于大量酵母和动物转录因子中的反式激活结构域。 -
翻译后 修改 泛素化,导致其蛋白酶体降解。 NF-kappa-B响应终止需要降解。 SETD6在Lys-310处单甲基化。 Lys-310的单甲基化被EHMT1的ANK重复序列识别,并促进靶基因受抑制染色质的形成,导致NF-kappa-B转录因子活性的下调。 Ser-311的磷酸化破坏了与EHMT1的相互作用,但未阻止Lys-310的单甲基化,并减轻了靶基因的抑制。 Ser-311的磷酸化破坏与EHMT1的相互作用并促进转录因子活性(通过相似性)。 Ser-536上的磷酸化刺激Lys-310上的乙酰化以及与CBP的相互作用; 磷酸化和乙酰化形式显示出增强的转录活性。 可逆乙酰化; 乙酰化似乎由CBP介导,而脱乙酰化则由HDAC3介导。 Lys-122处的乙酰化增强了DNA结合并损害了与NFKBIA的结合。在不影响DNA结合和NFKBIA结合的情况下,Lys-310处的乙酰基化是完整转录活性所必需的。 乙酰化还可以降低DNA结合并导致核出口。 与BRMS1的相互作用促进“Lys-310”的脱乙酰化。 -
手机定位 核心。 细胞质。 核,但在细胞质中也发现了与抑制剂(I-kappa-B)复合的非活性形式。 TNF-α诱导后在细胞核中用RELA染色。 -
UniProt提供的信息 -
替代名称 禽网状内皮增生病病毒(vrel)癌基因同源物A MGC131774型 NF-κB p65delta3
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数据库链接
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sELISA对抗体
图像
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在用LPS(10μg/ml,持续6小时)处理后,用低渗HEPES裂解缓冲液(pH 7.4)裂解细胞,并在4°C下1000 g离心10分钟,收集上清液并用于ELISA测定细胞内p65-NF-κB。 使用分光光度计在450 nm处读取吸光度。 -
用PMA和离子霉素(+)处理Jurkat细胞。 提取核裂解物( 约113474 )和40uL,对应于4e6细胞,在重复(+/-SD)中进行测试。 -
使用或不使用抑制剂滴定阳性对照,减去背景信号(重复;+/-SD)。 -
对从显示NFkB(p65)活性的受刺激(20 ng/ml TNF-α持续30分钟)和非受刺激HeLa细胞分离的细胞裂解物进行分析。
协议
数据表和文件
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数据表下载
工具书类 (86)
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