主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR4844]到SQSTM1/p62-自噬体标记 适用于:WB、Flow Cyt(Intra)、IP、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR4844]至SQSTM1/p62-自噬体标记 -
宿主 兔子 -
特异性 这种抗体在大鼠组织中的条带太弱,您可能需要优化实验方案(增加裂解液量,使用低稀释度或高灵敏度ECL底物)以获得可见条带。 然而,它在大鼠细胞系中表现良好。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:U-2 OS、MCF-7、HAP1、HCT116、HeLa、HepG2、SKBR-3、MCF-6和HEK-293T细胞裂解物; 小鼠和大鼠大脑、心脏和肺组织溶解。 ICC/IF:HeLa细胞(未经处理并用氯喹或巴非霉素处理)和HAP1细胞。 流式细胞仪(内部):HeLa细胞。 IP:U-2 OS细胞裂解物。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 在-20°C下稳定12个月。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油、0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR4844型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 Alexa Fluor®488抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记( ab185015年 ) HRP抗-SQSTM1/p62抗体[EPR4844]( ab194720年 ) Alexa Fluor®647抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]( ab194721年 ) Alexa Fluor®594抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记( 约203429 ) Alexa Fluor®555抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记( 约203430 ) 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-BSA和无叠氮化合物( 约219581 ) APC抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]( ab225093号 ) PE抗-SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记( ab225094号 )
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兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
靶标
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功能 结合泛素并可能通过TNF-α、神经生长因子(NGF)和白细胞介素-1调节NFKB1活化的适配器蛋白。 可能在肌肉细胞的TIN/TTN下游信号传导中发挥作用。 可能通过泛素化调节信号级联。 调节TRAF6和CYLD之间相互作用的适配器(通过相似性)。 可能参与细胞分化、凋亡、免疫反应和K(+)通道的调节。 -
组织特异性 普遍表达。 -
疾病相关 SQSTM1的缺陷是骨Paget病(PDB)的原因[MIM:602080]。 PDB是一种影响轴向骨骼的代谢性骨病,其特征是由于破骨细胞激活而导致局部骨转换增加和紊乱。 该疾病的表现包括骨痛、畸形、病理性骨折、耳聋、神经系统并发症和骨肉瘤风险增加。 PDB是一种慢性病,影响2-3%的40岁以上人口。 -
序列相似性 包含1个OPR域。 包含1个UBA域。 包含1个ZZ型锌指。 -
结构域 UBA结构域特异性结合多泛素化底物的“Lys-63”连接的多泛素链。 调节与TRIM55的交互。 OPR结构域介导同齐聚反应以及与PRKCZ、PRKCI、MAP2K5和NBR1的相互作用。 ZZ型锌指介导与RIPK1的相互作用。 -
翻译后修饰 磷酸化。 可能被PRKCZ磷酸化(根据相似性)。 通过TTN体外磷酸化。 -
细胞定位 细胞质。 晚期内体。 核心。 沙科姆(根据相似性)。 在心肌中,位于肌节带(根据相似性)。 定位于晚期内体。 也可能局限于细胞核。 分别在阿尔茨海默病和帕金森病患者的神经纤维缠结和神经元路易体中积聚。 富含毛细胞星形细胞瘤的罗森塔尔纤维。 在肝细胞中,积聚在与酒精性肝炎、威尔逊病、印度儿童肝硬化相关的马洛里体和与肝细胞癌相关的透明体中。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8878 人类 Entrez基因: 18412 鼠标 Entrez基因: 113894 老鼠 Omim公司: 601530 人类 瑞士保护银行: 问题13501 人类 瑞士保护银行: 问题64337 鼠标 瑞士保护银行: O08623号 老鼠 尤尼金: 709030 人类
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别名 A170抗体 DMRV抗体 60kDa抗体EBI 3相关蛋白
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图片
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ab109012染色野生型Hap1细胞和氯喹处理的SQSTM1敲除Hap1的细胞( 约142116 ,50μM,24小时)。 用100%甲醇(5分钟)或4%多聚甲醛(10分钟)固定细胞,然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用浓度为0.1μg/ml的ab109012培养细胞,并 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 当使用多聚甲醛固定时,在KO细胞中观察到残留信号,因此我们建议使用该抗体的甲醇固定。 或者,请使用 约240635 或 约207305 已在多聚甲醛和甲醇固定电池中进行KO验证。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-吞噬体标记(ab109012),1/10000稀释 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: SQSTM1敲除HEK293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 64千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在64 kDa下观察到ab109012。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 在蛋白质印迹中显示ab109012在野生型HEK293T细胞中与SQSTM1/p62反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约255343 (敲除细胞裂解物 约263770 )已使用。 野生型HEK293T和SQSTM1敲除型HEK2903T细胞裂解物接受SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab109012和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
ab109012染色对照HeLa细胞(左侧)中的SQSTM1/p62(自噬体)和经1uM巴非霉素A1处理的HeLa电池中的SQRTM1/p62( ab120497型 )18小时(右侧面板)。 细胞用甲醇固定(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用ab109012以5ug/ml和 约7291 (Tubulin)以1/1000稀释度在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)进一步孵育1小时( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor®594)( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以伪红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
SQSTM1在U2OSn细胞中的免疫沉淀。 制备裂解液,并使用1.0μg预先偶联到prot的ab109012进行免疫沉淀。 A-琼脂糖珠。 样品用GTX629890以1/5000的比例洗涤并处理以进行western blot。 该数据由YCharOS Inc.提供,该公司是一家开放科学公司,其使命是对每种商用抗体试剂进行表征。 Abcam正在与YCharOS合作,以支持他们使用敲除细胞系进行抗体特征化的任务。 -
在U-2 OS细胞中免疫沉淀SQSTM1。 制备裂解液,并使用1.0μg预先偶联到prot的ab109012进行免疫沉淀。 A-琼脂糖珠。 样品清洗后,用1/5000的SQSTM1/P62抗体进行western blot。 SM=10%起始材料; UB=10%未结合分数; IP=免疫沉淀。 这些数据由YCharOS Inc.提供,这是一家开放科学公司,其使命是表征所有人类蛋白质的市售抗体试剂。 Abcam和YCharOS正在合作,通过使生命科学界能够更好地评估商用抗体,帮助解决再现性危机。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-吞噬体标记(ab109012),1/10000稀释 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: SQSTM1敲除HAP1全细胞裂解物 3号车道: HeLa全细胞裂解物 车道4: HepG2全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在55 kDa时观察到ab109012。 红色-装载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 ab109012在野生型HAP1细胞中与SQSTM1特异性反应。 使用SQSTM1敲除样品时未观察到条带。 对野生型和SQSTM1基因敲除样品进行SDS-PAGE、Ab109012和 约8245 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别以1/10000和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 在成像前在室温下以1/2000稀释1小时的二次抗体。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记(ab109012) 车道1: 野生型HCT116细胞裂解物 车道2: SQSTM1 CRISPR/Cas9编辑的HCT116细胞裂解物 3号车道: HepG2细胞裂解物 车道4: HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 观察到的频带大小: 55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在55kDa下观察到ab109012。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 ab109012抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记物在野生型HCT116细胞中与SQSTM1/p62特异性反应。 CRISPR/Cas9编辑细胞系中观察到的条带 约266871 (CRISPR/Cas9编辑的细胞裂解物 ab257052号 )低于55kDa的车道可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型和SQSTM1/p62 CRISPR/Cas9编辑的样品进行SDS-PAGE。 ab109012和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-吞噬体标记(ab109012),1/10000稀释 车道1: 野生型U-2 OS细胞裂解物 车道2: SQSTM1敲除U-2 OS细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 Western blot显示ab109012与野生型U-2 OS细胞中的SQSTM1反应,在SQSTM2敲除细胞系中观察到信号丢失。 对野生型U-2OS和SQSTM1敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜在TBST中的5%牛奶中封闭1小时,然后在4°C下以1/10000稀释度与ab109012孵育过夜。 在成像之前,将印迹与0.2ug/mL的山羊抗兔HRP二级抗体孵育。 这些数据由YCharOS Inc.提供,这是一家开放科学公司,其使命是表征所有人类蛋白质的市售抗体试剂。 Abcam和YCharOS正在合作,通过使生命科学界能够更好地评估商用抗体,帮助解决再现性危机。 -
纯化ab109012染色野生型HAP1细胞中的SQSTM1(顶面板)和SQSTM2敲除HAP1的细胞(底面板)。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用ab109012以1μg/ml和 约195889年 以1/250稀释度(以伪红色显示)在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)进一步孵育1小时( 约150081 )浓度为2μg/ml(以绿色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
用纯化的ab109012在1/50稀释度(10µg/ml)(红色)下对标记SQSTM1/p62的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)细胞进行细胞内流式细胞术分析。 细胞用80%甲醇固定,并用0.1%吐温-20渗透。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488中, 约150077 )2000年1月使用二级抗体。 同位素对照-兔单克隆IgG(黑色)。 未标记对照-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-1/1000稀释的自噬体标记物(ab109012)(纯化) 车道1: MCF7(人乳腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: 小鼠脑裂解物 3号车道: 大鼠脑裂解物 车道4: 小鼠肺裂解物 车道5: 大鼠肺裂解物 车道6: 小鼠心脏裂解物 7号车道: 大鼠心脏裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 观察到的频带大小: 62千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
在0.4µg/ml的MCF7(人乳腺癌上皮细胞)裂解液上测试不同批次的ab109012。在每条车道上装载15µg裂解液。 在62 kDa下观察到的谱带。 -
所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记(ab109012)(未纯化) 车道1: MCF-7型 车道2: 希拉牌手表 3号车道: SKBR-3型 车道4: 293吨 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 观察到的频带大小: 62千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
重叠直方图显示未净化109012(红线)染色的HeLa细胞。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS吐温透化20分钟。然后将细胞在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育,以阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab109012,1/100稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约150077 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
HeLa细胞+/-氯喹中未经纯化的ab109012染色SQSTM1/p62(50μM,24小时)。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后在+4°C下用1μg/ml的ab109012和 约195889年 ,小鼠单克隆抗α-管蛋白(Alexa Fluor ® 594),稀释1/250(以伪红色显示),然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)进一步孵育1小时( 约150081 )浓度为2μg/ml(以绿色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
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文献 (325)
周毅(Zhou Y) 等。 一种新的长非编码RNA SP100-AS1通过海绵miR-622和稳定ATG3诱导结直肠癌的放射抗性。 细胞死亡差异 30:111-124 (2023). 公共医学:35978049 王伟 等。 锌填充蛋白CXXC5通过调节TSC1/mTOR信号通路促进乳腺癌的发生。 生物化学杂志 299:102812 (2023). 公共医学:36539038 Ji P公司 等。 基因工程益生菌作为肿瘤饥饿治疗的催化葡萄糖剥夺剂。 今日母校简介 18:100515 (2023). 公共医学:36582449 龚QY 等。 尿石蛋白A减轻小鼠创伤性脑损伤后血脑屏障的破坏并减轻神经元凋亡。 神经再生研究 17:2007-2013 (2022). 公共医学:35142690 周Q 等。 雷帕霉素全氟碳纳米粒预防顺铂所致肾损伤的安全性。 纳米材料(巴塞尔) 12:不适用(2022年)。 公共医学:35159680