主要功能和细节
一次性90分钟协议 灵敏度:10µg/ml 范围:10µg/ml-500µg/ml 样品类型:细胞裂解液、组织匀浆 检测方法:比色法 检测类型:半定量 反应对象:老鼠、人类
概述
-
产品名称 -
检测方法 比色法 -
精确度 批次内 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% A431提取物 6 2.4% 批次间 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% A431型 三 7.4% -
样品类型 细胞裂解液,组织匀浆 -
检测类型 半定量 -
灵敏度 10微克/毫升 -
混凝土 10微克/毫升- 500微克/毫升 -
检测时间 1小时 3000万 -
实验步骤 一步分析法 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 预测可用于: 老鼠 -
产品概述 Abcam的SMAD3(pS423/S425) 在体外 SimpleStep ELISA™(酶联免疫吸附测定)试剂盒用于人和小鼠细胞中SMAD3(pS423/S425)蛋白的半定量测量。
SimpleStep ELISA™采用标记捕获和检测抗体,免疫捕获溶液中的样本分析物。 整个复合物(捕获抗体/蛋白质/检测抗体)又通过抗标签抗体的免疫亲和性固定在孔中。 将样品或标准品添加到微孔中,然后添加抗体混合物。 孵育后,清洗微孔以去除未结合的物质; 然后添加TMB基板。 通过添加停止溶液停止反应,停止颜色发展并完成从蓝色到黄色的任何颜色变化。 信号的产生与结合分析物的量成比例,强度在450 nm处测量。 可选地,代替终点读数,TMB的发展可以在600nm下动态记录。
检测特异性
SMAD3(pS423/S425)测定检测细胞裂解物中SMAD3(GenBank登录号NP_001138574)的内源性水平,仅当在Ser423/425处磷酸化时。 根据序列相似性,可能会与SMAD2发生交叉反应。
物种反应性
该试剂盒检测人类和小鼠细胞培养提取物中的SMAD3(pS423/S425)。 预计也会在大鼠样本中检测到。 其他物种应逐个进行测试。
血清和血浆样本未使用此试剂盒进行测试。 -
说明 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 -
平台 微孔板
性能
-
存放说明 储存于+4°C。 请参阅协议。 -
组件 1 x 96测试 1 x 96测试 10X清洗缓冲液PT 1 x 15毫升 1 x 15毫升 50X细胞提取增强剂溶液 1 x 1毫升 1 x 1毫升 5X细胞提取缓冲液PTR 1 x 12毫升 1 x 12毫升 冻干SMAD3(pS423/S425)对照裂解液 1瓶 1瓶 平板密封件 1台 1台 单步预涂96孔微孔板(ab206978) 1台 1台 SMAD3(pS423/S425)捕获抗体 1 x 3毫升 1 x 3毫升 SMAD3(pS423/S425)检测抗体 1 x 3毫升 1 x 3毫升 停止解决方案 1 x 12毫升 1 x 12毫升 底物溶液 1 x 12毫升 1 x 12毫升 -
研究领域 -
功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变TGF介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合产生抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与作为负调控因子的14-3-3蛋白YWHAQ的分离,对其活性进行积极调节。 -
疾病相关 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
结构域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接子区域是TGFβ介导的转录活性所必需的,并与MH2结构域协同作用。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化。 在EGF和TGF-β治疗中,Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1在Ser-418处的磷酸化促进配体依赖的泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 在TGF-β信号传导过程中,ADP-核糖基化负调控SMAD3转录反应。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏转化生长因子β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1防止其对TGF-β的核移位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息 -
别名 DKFZP586N0721号 DKFZp686J10186号 hMAD 3号机组
查看所有内容 -
数据库链接 Entrez基因: 4088 人类 Entrez基因: 17127 鼠标 Entrez基因: 25631 老鼠 奥密姆: 603109 人类 瑞士保护银行: 第84022页 人类 瑞士保护银行: 问题8BUN5 鼠标 瑞士保护银行: 第84025页 老鼠 尤尼金: 727986 人类
查看所有内容
相关产品
-
相关产品
图片
-
SimpleStep-ELISA技术允许在一个步骤中形成抗体-抗原复合物,将测定时间减少到90分钟。 将样品或标准品和抗体混合物一次性添加到微孔中,培养、清洗并添加最终基质。 有关详细的分步指南,请参阅协议。 -
原始数据值显示在表中。 -
1X细胞提取缓冲液PTR中的典型SMAD3(pS423/S425)控制裂解物稀释系列的示例。 SMAD3裂解液稀释系列的制备如所述。 原始数据值显示在表中。 -
代表性样品基质中稀释度的线性。 在含有1X细胞提取缓冲液PTR的普通介质中制备3种浓度的细胞裂解物。 对SMAD3(pS423/S425)的重复测量数据进行归一化和绘图。 -
TGF-β处理诱导HeLa细胞SMAD3(pS423/S425)磷酸化。 HeLa细胞在96周的组织培养板中培养,在细胞溶解之前,用TGF-β剂量范围处理血清(60分钟)。 绘制了SMAD3(pS423/S425)的四次测量数据。 -
SB431542处理对HeLa细胞SMAD3(pS423/S425)磷酸化的抑制作用。 HeLa细胞在96周的组织培养板中培养,并用SB431542(60分钟)的剂量范围处理。 然后用TGF-β刺激细胞(60分钟)并裂解。 绘制了SMAD3(pS423/S425)的四次测量数据。 -
SMAD3裂解液稀释系列的制备如所述。 原始数据值显示在表中。 试剂盒对照裂解物以在不同批次之间提供一致信号的浓度提供。 根据信号强度生产和配制裂解液,使其与前一批次的30%保持一致。 因此,对照裂解物不具有蛋白质浓度。
实验方案
数据表及文件
-
SDS下载 -
数据表下载
文献 (5)
品考D 等。 Fortilin与TGF-ß1相互作用并阻止TGF-ß受体活化。 公共生物 5:157 (2022). 公共医学:35197550 关R 等。 几丁质酶样蛋白YKL-40通过TGF-ß1/Smads途径调节人支气管上皮细胞的增殖、凋亡和迁移。 人类实验毒物 39:451-463 (2020). 公共医学:31797699 哈桑AA 等。 在5/6肾切除的GLP-1受体敲除小鼠中,二肽基肽酶4型抑制剂利格列汀对GLP-1感受器依赖性肾保护作用的机制。 肾脏Int 95:1373-1388 (2019). 公共医学:30979564 塔尼诺Y 等。 Syndecan-4通过减弱TGF-ß信号抑制肺纤维化的发展。 国际分子科学杂志 20:不适用(2019)。 公共医学:31600983 库迪普迪PK 等。 β聚糖(TßRIII)是青春期前大鼠支持细胞TGF-\223,2信号转导的关键因子。 国际分子科学杂志 20:不适用(2019)。 公共医学:31835434