主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EP568Y]抗Smad3-BSA和无叠氮化合物 适用于:ChIC/CUT&RUN-seq、IHC-P、夹心ELISA、WB、ICC/IF、Flow Cyt(Intra) 敲除已验证 反应对象:大鼠、人
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
日本 兔单克隆抗体 [EP568Y]至Smad3-无BSA和叠氮化物 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 预测可用于: 鼠标 -
免疫原 对应于人Smad3的合成肽(内部序列)。 -
阳性对照 WB:A549和HeLa细胞裂解物; 人肾组织裂解物。 ICC/IF:HepG2和人颗粒细胞。 IHC-P:人类乳腺癌、胃腺癌、肺腺癌、结肠腺癌、胶质瘤和肝组织。 流式细胞仪(内部):HT-29和HCT116细胞。
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常规说明 ab157372是无载波版本的 约40854 . 我们的 无载体 抗体通常以只含PBS的配方提供,纯化后不含BSA、叠氮化钠和甘油。 无载体缓冲液和高浓度允许提高缀合效率。 这种共轭-成熟格式设计用于荧光色素、金属同位素、寡核苷酸和酶,使其成为抗体标记、功能和基于细胞的分析、基于流的分析(例如,质谱仪)和多重成像应用的理想选择。 使用我们的 接合试剂盒 抗体结合物在20分钟内即可使用,动手时间<1分钟,抗体回收率100%:可用于荧光染料、HRP、生物素和金。 此产品与Maxpar兼容 ® Fluidigm抗体标记试剂盒,无需抗体制备。 Maxpar公司 ® 是Fluidigm Canada Inc.的商标。 该产品是一种重组单克隆抗体,具有以下优点: -高批次一致性和再现性 -提高敏感性和特异性 -长期供应安全 -无动物制作
有关更多信息 请看这里 . 我们的RabMAb ® 该技术是一种基于杂交瘤的专利技术,用于制备兔单克隆抗体。 有关我们专利的详细信息,请参阅 拉布MAb ® 专利 .
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 储存于+4°C。 请勿冻结。 -
存储溶液 成分:PBS -
无载体 是 -
正在加载浓度信息。。。 -
发动机 纯化蛋白A -
纯化说明 通过MabSelect SuRe纯化蛋白质A -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP568Y型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
共轭试剂盒 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白
应用
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靶标
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变TGF介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合产生抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与作为负调控因子的14-3-3蛋白YWHAQ的分离,对其活性进行积极调节。 -
疾病相关 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
结构域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接子区域是TGFβ介导的转录活性所必需的,并与MH2结构域协同作用。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化。 在EGF和TGF-β治疗中,Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1在Ser-418处的磷酸化促进配体依赖的泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 在TGF-β信号传导过程中,ADP-核糖基化负调控SMAD3转录反应。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏转化生长因子β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1防止其对TGF-β的核移位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 4088 人类 Entrez基因: 17127 鼠标 Entrez基因: 25631 老鼠 奥密姆: 603109 人类 瑞士保护银行: 第84022页 人类 瑞士保护银行: 问题8BUN5 鼠标 瑞士保护银行: 第84025页 老鼠 尤尼金: 727986 人类
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别名 DKFZP586N0721抗体 DKFZp686J10186抗体 hMAD 3抗体
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图片
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所有车道: 抗S-mad3抗体[EP568Y]( 约40854 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-Smad3抗体[EP568Y]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约40854 显示为与Smad3特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到50 kDa的条带,在SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约277888 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物无)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于50kDa的裂解液通道中观察到的谱带可能代表Smad3的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析野生型和SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 抗S-mad3抗体[EP568Y]( 约40854 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: SMAD3敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: 人肾细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 该数据是在不同的缓冲液配方中使用相同的抗体克隆得到的( 约40854 ). 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约40854 在48kDa下观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约40854 western blot显示与Smad3反应。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约40854 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/1000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
克隆EP568Y(ab157372)已被Abcam成功偶联。 此图像是使用抗S-mad3抗体[EP568Y](Alexa Fluor®488)生成的。 请参阅 约204257 了解协议详细信息。 约204257 HepG2细胞Smad3染色。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约204257 稀释度为1/100(以绿色显示) 约195889年 ,小鼠单克隆抗α-管蛋白(Alexa Fluor ® 594),稀释度为1/250(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 在用100%甲醇固定的HepG2细胞(5分钟)中,在相同的测试条件下,该产品也发出阳性信号。 -
克隆EP568Y(ab157372)已被Abcam成功偶联。 此图像是使用Anti-Smad3抗体[EP568Y](Alexa Fluor®647)生成的。 请参阅 约204461 了解协议详细信息。 约204461 HepG2细胞Smad3染色。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约204461 稀释度为1/100(以红色显示) 约195887年 ,小鼠单克隆抗α-管蛋白(Alexa Fluor ® 488),稀释度为1/250(以绿色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 在用100%甲醇固定的HepG2细胞(5分钟)中,在相同的测试条件下,该产品也发出阳性信号。 -
克隆EP568Y(ab157372)已被Abcam成功偶联。 该图像是使用抗S-mad3抗体[EP568Y](PE)生成的。 请参阅 ab208751年 了解协议详细信息。 约208751 HepG2细胞Smad3染色。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞在+4°C下培养过夜 约208751 稀释度为1/1000( 绿色假彩色 )和 1958年4月 、大鼠单克隆抗Tubulin(Alexa Fluor ® 647),稀释度为1/250(以红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
重叠直方图显示HCT116细胞未经纯化染色 约40854 (红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体( 约40854 ,1/100稀释)在22°C下保持30分钟。 使用的二级抗体是DyLight ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约96899 )在22°C下,1/500稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 该数据是在含有PBS、BSA、甘油和叠氮化钠的不同缓冲液配方中使用相同的抗体克隆得到的( 约40854 ). -
该ELISA数据是使用相同的抗Smad3抗体克隆EP568Y在不同的缓冲液配方(cat# 约40854 ). Smad3的标准曲线(分析物: Smad3蛋白(His标签)(ab89353,未纯化) ); 使用捕获抗体的稀释范围为1pg/ml至1µg/ml 小鼠单克隆[AF9F7]到Smad3(ab75512) 5µg/ml和检测器抗体 兔Smad3单克隆抗体[EP568Y](ab40854) 0.5µg/ml。
数据表及文件
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