主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EP568Y]到Smad3 适用于:Flow Cyt(Intra)、ChIC/CUT&RUN-seq、WB、IHC-P、夹心ELISA、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:大鼠、人
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EP568Y]至Smad3 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠,人类 预测可用于: 老鼠、鸡、猪 -
免疫原 -
阳性对照 WB:A549、HeLa、人肾、HT-29、HT-1080和Jurkat全细胞裂解物; 大鼠肝组织裂解物。 IHC-P:前列腺癌、乳腺癌、结肠腺癌、肺腺癌、胃腺癌、胶质瘤和肝组织。 ICC/IF:HepG2细胞。 流式细胞仪(内部):HCT116和HT-29细胞。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:40%甘油、0.05%BSA、59%PBS -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP568Y型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
共轭试剂盒 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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靶标
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变TGF介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合产生抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与14-3-3蛋白YWHAQ的解离来积极调节PDPK1激酶活性,YWHAQ作为负调节因子。 -
疾病相关 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
结构域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接子区域是TGFβ介导的转录活性所必需的,并与MH2结构域协同作用。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残留物磷酸化。 在EGF和TGF-β治疗中,Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1对Ser-418的磷酸化促进配体依赖性泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 在TGF-β信号传导过程中,ADP-核糖基化负调控SMAD3转录反应。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏TGF-β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,当与SMAD4复合时迁移到细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1防止其对TGF-β的核移位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 4088 人类 Entrez基因: 17127 鼠标 Entrez基因: 397260 清管器 Entrez基因: 25631 老鼠 Omim公司: 603109 人类 瑞士保护银行: 第84023页 鸡肉 瑞士保护银行: 第84022页 人类 瑞士保护银行: 问题8BUN5 鼠标
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别名 DKFZP586N0721抗体 DKFZp686J10186抗体 hMAD 3抗体
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图片
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使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab40854[EP568Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab40854[EP568Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNase、经hTGF-β1(7 ng/mL 1 h)和5µg ab40854[EP568Y]处理的2.5 x 10^5 A549(人肺癌细胞系)细胞进行ChIC/CUT&RUN。 所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序,测序深度为1000万读。 阴性IgG对照 约172730 图中还显示了。 日内瓦大学拥有与ChIC(染色质免疫清洗)方法相关的专利。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗S-mad3抗体[EP568Y](ab40854) 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗-Smad3抗体[EP568Y]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负载控制染色,以红色显示。在Western blot中,ab40854显示与Smad3特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到50 kDa的条带,在SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约277888 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物无)。 在CRISPR-Cas9编辑的低于50kDa的裂解液通道中观察到的谱带可能代表Smad3的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析了野生型和SMAD3 CRISPR-Cas9编辑的A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗S-mad3抗体[EP568Y](ab40854) 车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: SMAD3敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 3号车道: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道4: 人肾细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在48 kDa下观察到ab40854。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 western blot显示ab40854与Smad3反应。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )在与ab40854和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/1000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
石蜡包埋人结肠腺癌组织的免疫组织化学分析,用未纯化的ab40854标记Smad3。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
2000年1月1日用纯化的ab40854标记Smad3(绿色)的HepG2细胞的免疫细胞电泳/免疫荧光分析。 细胞用4%多聚甲醛固定。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合羊抗兔IgG(1/200)用作二级抗体(绿色,左面板)。 用DAPI(蓝色,右侧面板)进行复染。 -
重叠直方图显示HCT116细胞被未净化的40854染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab40854,1/100稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是DyLight ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约96899 )在22°C下,1/500稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 -
Smad3的标准曲线(分析物: Smad3蛋白(His标签)(ab89353,未纯化) ); 使用捕获抗体的稀释范围为1pg/ml至1µg/ml 小鼠单克隆[AF9F7]到Smad3(ab75512) 5µg/ml和检测器抗体 兔单克隆[EP568Y]到Smad3(ab40854) 0.5µg/ml。 -
ab40854用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)染色人类颗粒细胞中的Smad3。 用多聚甲醛固定细胞,用乙醇和triton渗透,并在26°C下封闭1小时。 样品与一级抗体(1/200)在4°C下孵育16小时。 未稀释的IRDye ® 用800CW结合的山羊抗兔IgG(H+L)多克隆作为二级抗体。 左-阴性对照(4次重复)。 -
所有车道: 1/5300稀释(纯化)的抗S-mad3抗体[EP568Y](ab40854) 车道1: HT-29细胞裂解物 车道2: HT-1080细胞裂解物 每条泳道10µg的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 1/1000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗兔IgG(H+L) 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 58千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 -
1/5000稀释(未纯化)的抗-Smad3抗体[EP568Y](ab40854)+10µg的Jurkat细胞裂解物 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 55千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
1/5300稀释(纯化)的抗S-mad3抗体[EP568Y](ab40854)+10µg的大鼠肝组织裂解物 次要 1/1000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗兔IgG(H+L) 预测的带宽大小: 48千Da 观察到的频带大小: 58千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 -
HT-29细胞的细胞内流式细胞术分析,用纯化的ab40854在1/210处标记Smad3(红色)。 细胞用2%多聚甲醛固定。 以FITC-偶联山羊抗兔IgG(1/150)作为二级抗体。 绿色-同位素对照,兔单克隆IgG。 -
2000年1月用纯化ab40854对人类肝组织标记Smad3进行免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 使用Tris/EDTA缓冲液pH 9进行热介导抗原检索。 使用预先稀释的HRP聚合物结合的抗兔IgG作为二级抗体。 苏木精会签。 -
人类前列腺癌组织标记未纯化ab40854的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析,稀释度为1/100。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
人类乳腺癌组织标记未纯化ab40854的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
人肺腺癌组织标记未纯化ab40854的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
未纯化ab40854标记人脑胶质瘤组织的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
人类胃腺癌组织标记未纯化ab40854的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (271)
郑毅 等。 抗PAI-1单克隆抗体抑制食管鳞癌的转移和生长。 J癌症 14:114-128 (2023). 公共医学:36605486 科普鲁鲁M 等。 鉴定调节体脂分布的罕见功能丧失遗传变异。 临床内分泌与代谢杂志 107:1065-1077 (2022). 公共医学:34875679 魏伟 等。 肺痹汤指示血清抑制RAW264.7细胞和BMDM中脂多糖诱导的炎症。 实验治疗学 23:110(2022年)。 公共医学:34976152 吴F 等。 TGF-βRII通过促进PKM2核移位调节口腔癌相关成纤维细胞的葡萄糖代谢。 细胞死亡发现 8:3 (2022). 公共医学:35013150 张Z 等。 HERC3通过直接泛素化降解EIF5A2调节上皮间质转化,抑制结直肠癌转移。 细胞死亡病 13:74(2022)。 公共医学:35064108