主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR23681-40]到Smad2(磷酸化S467) 适用于:IHC-P、Flow Cyt(Intra)、Dot-blot、WB、IP、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
(美国)
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产品名称 -
日本 兔单克隆抗体 [EPR23681-40]至Smad2(磷酸化S467) -
宿主 兔子 -
土耳其 针对磷S467和磷S465的双磷化肽产生该抗体。 斑点杂交显示,该抗体自身与磷蛋白S467结合,但磷蛋白S465的存在增强了这种结合。 我们的数据表明,在斑点杂交中,这种抗体不能单独结合磷酸S465。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:用20 ng/ml TGF-β1处理/未处理的野生型HeLa。 用20ng/ml TGFβ1和50µM MG-132处理/未处理的NIH/3T3。 IHC-P:人体胃组织。 人结肠癌组织。 小鼠心肌。 大鼠肺组织。 ICC/IF:用TGF-β1处理HeLa和NIH/3T3细胞。 流式细胞术(内):用TGF-β1处理HeLa和NIH/3T3细胞。 IP:用TGF-β1处理的HeLa和NIH/3T3细胞。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59.94%PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EPR23681-40型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物
美国
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靶标
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD2/SMAD4复合物时激活转录。 可能在结直肠癌中起到抑癌作用。 -
组织特异性 在骨骼肌、心脏和胎盘中高水平表达。 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
翻译后修饰 对一个或多个Thr-220、Ser-245、Ser-250和Ser-255进行磷酸化。 作为对TGF-β的反应,TGF-贝塔和激活素1型受体激酶在Ser-465/467上磷酸化。 当Ser-465/467磷酸化时,能够与SMURF2相互作用,招募其他蛋白质,如SNON进行降解。 作为对核心蛋白的反应,核心蛋白是TGF-β信号的天然抑制剂,在Ser-240上被CaMK2磷酸化。 MAPK3对EGF刺激的磷酸化作用; 增加转录活性和稳定性,并被钙调蛋白阻断。 对TGF-β的反应,NEDD4L泛素化; 促进其降解。 辅活化子在Lys-19上乙酰化以响应TGF-β信号传导,从而增加转录活性。 短异构体:乙酰化增加体外DNA结合活性并增强其与体内靶启动子的关联。 TGF-β增强了EP300在细胞核中的乙酰化作用。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏TGF-β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核。 通过磷酸酶PPM1A进行去磷酸化,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 4087 人类 Entrez基因: 17126 鼠标 Entrez基因: 29357 老鼠 Omim公司: 601366 人类 瑞士保护银行: 第15796季度 人类 瑞士保护银行: Q62432问题 鼠标 瑞士保护银行: O70436号机组 老鼠 尤尼金: 12253 人类
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别名 果蝇,MADR2抗体的同源物 hMAD-2抗体 HsMAD2抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗S-mad2(磷酸化S467)抗体[EPR23681-40](ab280888) 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞),全细胞裂解物 车道2: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)用20 ng/ml转化生长因子β1处理15分钟,全细胞裂解物 3号车道: Smad2敲除HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞),全细胞裂解物 车道4: Smad2敲除HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞),用20 ng/ml TGF-β1处理15分钟,全细胞裂解 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye®800CW)( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 60千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 阻隔和稀释缓冲液及浓度:Intercept®(TBS)阻隔缓冲液用等体积的0.1%TBS稀释 1-4车道:合并信号灯(红色和绿色)。 绿色-在60 kDa下观察到ab280888。 红色-加载控制 约8245 (小鼠单克隆[6C5]到GAPDH)在36 kDa时观察到。 ab280888抗S-mad2(磷酸化S467)抗体[EPR23681-40]在野生型HeLa细胞中与Smad2特异性反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 ab255430型 (敲除细胞裂解物 约263833 )被使用。 野生型和Smad2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab280888和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )4点孵化? 隔夜,稀释度分别为1000分之一和20000分之一。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
使用ab280881:1000(0.524µg/ml),然后使用山羊抗狂犬病IgG,(H+L),过氧化物酶结合物,对Smad2(磷酸化S467)进行斑点杂交分析( ab97051型 )稀释度为1:100000。 车道1 :Smad2肽(aa 458-467) 2号车道 :Smad2(磷酸化S465)肽(aa 458-467) 3号车道 :Smad2(磷酸化aa S465/S467)肽(aa 458-467) 4号车道 :Smad2(磷酸化S467)肽(aa 458-467) 曝光时间:3分钟 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST -
在1/50(10.48µg/ml)稀释度下用ab280888对4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透HeLa细胞标记Smad2(磷酸化S467)进行免疫荧光分析,然后 约150077 羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)抗体,稀释度为1/1000(绿色)。 共聚焦图像显示用TGF-β1(20 ng/ml)处理15分钟后HeLa细胞的主要核染色。 约195889年 使用抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa-Fluro®594)在1/200稀释度下对微管蛋白进行反染色(红色)。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150077 羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488),稀释度为1/1000。 -
从0.35 mg HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)中免疫沉淀Smad2(磷酸化S467),用20ng/ml TGF-β1处理15分钟,用ab280881以1/30稀释度(0.35 mg裂解液中2µg)溶解10µg全细胞。 使用ab280888在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 )以1/5000稀释度使用。 车道1 :用20ng/ml TGF-β1处理HeLa 15分钟,全细胞裂解物10µg 2号车道 :用20ng/ml TGF-β1处理HeLa中的ab280888 IP 15分钟全细胞裂解物 3号车道 :兔单克隆IgG( 约172730 )用20ng/ml TGF-β1处理HeLa中15分钟的全细胞裂解液代替ab280888 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:15秒。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗S-mad2(磷酸化S467)抗体[EPR23681-40](ab280888) 车道1: 用20ng/ml TGF-β1处理HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)15分钟,在10µg 车道2: 用20ng/ml TGF-β1处理HeLa 15分钟,10µg的全细胞裂解液(磷酸酶处理膜) 3号车道: 20µg HeLa全细胞裂解液 车道4: 用20ng/ml TGF-β1处理HeLa 15分钟,20µg的全细胞裂解液 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 60千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 观察到的分子量与文献中描述的一致。 (PMID:24959295) TGF-β1处理HeLa(PMID:24959295)诱导pSmad2(S467)上调。 曝光时间:3分钟 -
所有车道: 稀释1/1000的抗S-mad2(磷酸化S467)抗体[EPR23681-40](ab280888) 车道1: 用20ng/ml TGF-β1和50µM MG-132处理NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)15分钟,全细胞裂解物 车道2: 用20ng/ml TGF-β1和50µM MG-132处理NIH/3T3 15分钟的全细胞裂解物(磷酸酶处理膜) 3号车道: NIH/3T3全细胞裂解物 车道4: 用20ng/ml TGF-β1和50µM MG-132处理NIH/3T3 15分钟,全细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/100000 预测的带宽大小: 52千Da 观察到的频带大小: 60千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 观察到的分子量与文献中描述的一致。 (PMID:24347165) TGF-β1诱导NIH/3T3(PMID:24347165)pSmad2(S467)上调 曝光时间:3分钟 -
石蜡包埋的人结肠癌组织的免疫组织化学分析,用1/2000(0.262µg/ml)稀释的ab280888标记Smad2(磷酸化S467),然后用现成的兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 未经碱性磷酸酶处理的人结肠癌细胞核染色(图像A)。 用碱性磷酸酶处理组织时未检测到信号(图像B)。 该切片在室温下与ab280888孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体已准备好使用兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
用ab280881/2000(0.262µg/ml)稀释的石蜡包埋小鼠心肌组织标记Smad2(磷酸化S467)的免疫组织化学分析,然后使用现成的兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 未经碱性磷酸酶处理的小鼠心肌细胞核染色(图像A)。 用碱性磷酸酶处理组织时未检测到信号(图像B)。 该切片在室温下与ab280888孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体已准备好使用兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
用ab280888在1/2000(0.262µg/ml)稀释度下对石蜡包埋的大鼠肺组织标记Smad2(磷酸化S467)进行免疫组织化学分析,然后使用现成的兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 未经碱性磷酸酶处理的大鼠肺细胞核染色(图像A)。 用碱性磷酸酶处理组织时未检测到信号(图像B)。 该切片在室温下与ab280888孵育30分钟。 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体已准备好使用兔特异性IHC聚合物检测试剂盒HRP/DAB( 约209101 ). 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
在1/50(10.48µg/ml)稀释度下用ab280888对4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透NIH/3T3细胞标记Smad2(磷酸化S467)进行免疫荧光分析,然后 约150077 羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)抗体,稀释度为1/1000(绿色)。 共聚焦图像显示,经TGF-β1(20 ng/ml)处理15分钟后,NIH/3T3细胞主要呈核染色。 约195889年 使用抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa-Fluro®594)在1/200稀释度下对微管蛋白进行反染色(红色)。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150077 羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488),稀释度为1/1000。 -
从0.35 mg NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)中免疫沉淀Smad2(磷酸化S467),用20ng/ml TGF-β1 50µM mg-132处理15分钟,用ab280881以1/30稀释度(0.35 mg裂解液中2µg)溶解10µg全细胞。 使用ab280888在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 IP检测试剂VeriBlot(HRP)( 阿布131366 )以1/5000稀释度使用。 车道1 :用20ng/ml TGF-β1 50µM MG-132处理NIH/3T3 15分钟,全细胞裂解物10µg 2号车道 :用20ng/ml TGF-β1 50µM MG-132处理20 ng/ml NIH/3T3中的ab280888 IP 15分钟,全细胞裂解物 3号车道 :兔单克隆IgG( 约172730 )用20ng/ml TGF-β1 50µM MG-132处理20 ng/ml NIH/3T3中的ab2808815分钟,而不是ab280888,全细胞裂解 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:32秒。
实验方案
数据表及文件
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合格证书
文 (12)
郑Y 等人。 抗PAI-1单克隆抗体抑制食管鳞癌的转移和生长。 J癌症 14:114-128 (2023). 公共医学:36605486 吴F 等人。 TGF-βRII通过促进PKM2核移位调节口腔癌相关成纤维细胞的葡萄糖代谢。 细胞死亡发现 8:3 (2022). 公共医学:35013150 张Z 等人。 HERC3通过直接泛素化降解EIF5A2调节上皮间质转化,抑制结直肠癌转移。 细胞死亡病 13:74 (2022). 公共医学:35064108 李G 等人。 miR-155通过靶向SMAD2和抑制NLRP3/Caspase-1通路抑制膝关节骨性关节炎软骨细胞的凋亡。 整形外科研究杂志 17:48 (2022). 公共医学:35090521 金·D 等人。 klotho对糖尿病肾病足细胞SRGAP2a表达的影响。 BMC肾病 23:151 (2022). 公共医学:35436879