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了解如何重编程诱导多能干细胞 (iPSC)、如何保护与分化多能干细胞 (PSC)以及针对不同分化类型的细胞使用哪些标志物
使用多能干细胞 (PSC)进行的研究已彻底改变了再生医学以及我们模拟人类疾病的方式。这些细胞通常分为两类:来源于囊胚期胚胎的胚胎干细胞 (电子稳定控制系统)和诱导多能干细胞 (iPSC)后者从成年体细胞被诱导成为多能细胞。通常,生产和培养这两类 产品分成合同公司
在此,我们将为您介绍 产品分成合同工作流程中最重要的步骤,包括以下内容。
目录
迫使体细胞表达与多能性相关的转录因子,如 10月4日、Klf4、Sox2、cMyc等等iPSC(Takahashi等人,2006年)目前已通过多种转录因子组合的方法,成功诱导重编程iPSC公司细胞的产生。常用的 iPSC公司重编程方法有化学方法(皇甫等,2008)和慢病毒和逆转录病毒转染,后者可将编码多能基因的 DNA整合到宿主基因组中(Yu等人,2007)
我们提供多种不同的生化试剂,可以帮您将成体细胞重编程为 iPSC以下为部分关键示例:
雷帕霉素(百万TOR抑制剂)与27632年(岩石抑制剂)搭配使用可对人乳腺癌细胞 (MDA-MB-468)进行重编程,诱导 7天后的有效率为 90%(袁等人,2018)使用 2微米Y27632和雷帕霉素可以实现这一重编程。
糖原合成酶激酶3(GSK-3)抑制剂第99021期 可用于重编程已转导表达 10月4日和 Klf4公司的小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)(Li等人,2009年)这是首例在 Sox2系统未表达情况下产生 iPSC公司的情况。我们用 10μM芯片99021对 MEF公司细胞进行了四周的处理。
BIX 01294组蛋白甲基转移酶抑制剂搭配 10月4日和 Klf4公司表达可将小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)重编程为 PSC(Shi等人,2008)
要想维持 产品分成合同的多能性状态,需谨慎操作。产品分成合同需要严格的培养基和传代方法,才可以保持健康和未分化状态。常用的两种 产品分成合同培养系统分别是饲养层依赖型培养系统或无饲养层培养系统。
饲养层依赖型培养
饲养层依赖型培养系统使用一层饲养层细胞,该层细胞可为 产品分成合同和MEF公司通常被用作饲养细胞。
无饲养层培养
无饲养层培养系统使用替代培养基,该培养基可提供 产品分成合同所需的所有生长因子。这一培养系统使用起来可能更为简单,因为细胞可以在简单的基质包被板上生长,因此您无需担心下游实验前的饲养细胞去除步骤。您也可以使用生化药物来帮助维持无饲养培养系统中的多能性,如合同条款-1(多能性)、双激酶和 全球技术计划酶抑制剂。
此外,您还需查看您的 PSC、确保其仍然处于多能性状态。在 西方印迹或 国际商会等应用中使用未分化的细胞标志物来查看这一状态不失为一种很好的方法。检查细胞是否具有多能性时,最好使用未分化的细胞标志物,如 10月4日 和 Sox2
我们建议您使用以下未分化的细胞标志物:
重组抗10月4日抗体[EPR17929]-ChIP公司级(ab181557)
重组抗SOX2标准抗体[EPR3131](ab92494)
重组抗KLF4型抗体[EPR20753-25](ab214666)
重组抗c-Myc公司抗体[Y69](ab32072)
重组抗纳克抗体[EPR20694]-中国知识产权局级(ab214549)
您也可以尝试我们的胚胎干细胞标志物套装,为您的研究找到正确的标志物。
胚胎干细胞标志物套装(人:10月4日、纳克、Tra-1-60型、SOX2标准、上海证券交易所4)(约109884年)
与此处列出的未分化细胞标志物一样,未分化细胞标志物由未分化的 产品分成合同表达,但单独使用这些标志物并不能保证您所使用的细胞具有多能性。要想充分确定多能性,有必要同时使用功能性检测试剂盒对 产品分成合同进行检查。
如果您的 产品分成合同正在培养物中生长,并且您检查后发现它们正在表达未分化的细胞标志物,这时,您就可以开始将 产品分成合同分化为您感兴趣的细胞类型。由于 产品分成合同等等(“鸡尾酒”)来完成。在此,我们列出了产品分成合同诱导分化成各类不同细胞所需要的诱导因子,供大家参考。
生化试剂
神经细胞类型
SB431542,ALK公司抑制剂与 诺金 搭配使用可将 产品分成合同分化为神经前体细胞 (Chambers等人,2009年)
AICAR公司(阿卡德辛/AICA)、AMPK激活剂可诱导神经干细胞的星形胶质细胞分化 (Zhang等人,2008)
心肌细胞类型
5-氮杂胞苷可促进间充质干细胞向心肌细胞分化 (Makino等人,1999年)
糖原合成酶激酶3(GSK-3)是的智利99021可将 产品分成合同分化为心肌细胞 (Lian等人,2013)
肝细胞类型
丁酸钠可从 电子稳定控制系统生成肝细胞 (Rambhatla等人,2003年)
胰腺细胞类型
RepSox,转化生长因子-β1型受体抑制剂将诱导 产品分成合同成为胰岛 β 细胞 (Hosoya等人,2012年)
生长因子和细胞因子
成纤维细胞生长因子 (FGF)家族成员在干细胞分化为 三个胚层的过程中发挥重要作用。不同 FGF公司蛋白与其他生长因子,如骨形态发生蛋白 (BMP)、Wnts和表皮生长因子 (表皮生长因子)搭配使用可促使这些胚层分化为特定的细胞类型。下面介绍几种不同细胞类型的生长因子组合。
神经细胞类型
FGF-2型和表皮生长因子搭配使用可从 产品分成合同中制备神经前体细胞 (Ostenfeld等人,2004年)
BMP-2型、骨形态发生蛋白-4、激活素A类 、FGF公司和Wnt5a型 同时使用可促使 产品分成合同向心肌祖细胞分化 (Rajala等人,2011年)
FGF-10型和FGF-7型可将 产品分成合同分化为胰岛 β 细胞祖细胞 (Shahjalal等人,2018年)
Wnt3a型、激活素A类、FGF4类、骨形态发生蛋白-4、肝细胞生长因子 (高生长因子)同时使用可生成肝前体细胞 (Du等人,2018)
肺细胞类型
骨形态发生蛋白-4、Wnt3a型、FGF-10型、表皮生长因子 和视黄酸(RA)同时使用可从 产品分成合同产生肺泡 二型样上皮细胞 (Ghaedi等人,2015年)
产品分成合同分化为目标细胞类型(例如神经、心脏、肺等)后,应该检查细胞是否不再表达上述未分化的细胞标志物(10月4日、KLF-4、c-Myc、Sox2等)。您可以按照 2.PSC维护 进行未分化标志物检测来确认
接下来,还应该检查生成的细胞类型是否正是您的目标细胞类型。在此,我们列出了一些标志物抗体,用以检测各种不同的细胞类型。
胚层
中胚层
Brachyury公司蛋白:重组抗Brachyury/布莱蛋白抗体[EPR18113](ab209665)
CD31:重组抗CD31型抗体[EP3095](ab134168)
CD34:重组抗CD34型抗体[EP373Y](ab81289)
骨形态发生蛋白2:重组抗骨形态发生蛋白2抗体[EPR20807](ab214821)
骨形态发生蛋白4:重组抗骨形态发生蛋白4抗体[EPR6211](ab124715)
N个-钙粘蛋白:抗N个钙粘蛋白抗体 (ab18203)
节点:重组抗节点抗体[EPR2057](ab109317)
蜗牛:重组抗蜗牛抗体[EPR21043](ab216347)
内胚层
Sox17:重组抗SOX17标准抗体[EPR20684](ab224637)
FOXA2:重组抗FOXA2公司抗体[EPR4466](ab108422)
GATA4:重组抗GATA4协议抗体[EPR4768](ab134057)
外胚层
巢蛋白:重组抗巢蛋白抗体 [SP103](ab105389)
槽口1:重组抗槽口1抗体[EP1238Y](ab52627)
TP63:重组抗第63页抗体[EPR5701](ab124762)
神经干细胞
Fas公司:重组抗Fas公司抗体[EPR5700](ab133619)
卷发-9:重组抗卷发9抗体[EPR4011](ab108628)
MSI1(武藏-1):重组抗 武藏1/Msi1抗体 [EP1302](ab52865)
MSl2(武藏-2):重组抗 MSI2系列抗体 [EP1305Y](ab76148)
诺金:重组抗诺金抗体[EPR1561](ab124977)
第6页:重组抗PAX6抗体[EPR15858](ab195045)
Sox1:重组抗SOX1标准抗体[EPR4766](ab109290)
Sox2:重组抗SOX2标准抗体[SP76](ab93689)
胞胞
α-突触核蛋白: 重组抗 α-突触核蛋白抗体 [MJFR1](ab138501)
NCAM公司:重组抗 NCAM1号机组抗体 [EP2567Y](ab75813)
双皮质:重组抗双肾上腺皮质激素抗体 [EPR10935(B)](ab167400)
GABA B公司受体:重组抗 GABA B公司[希腊语]1抗体 [EPR22954-47](ab238130)
GAP-43:重组抗GAP43(总距43)抗体[EP890Y](ab75810)
谷氨酰胺合成酶:重组抗谷氨酰胺合成酶抗体 [EPR13022(B)](ab176562)
MASH1:重组抗MASH1/Achaete-scute公司环球公司1抗体[EPR19840](ab211327)
mGluR1α:重组抗mGluR1a型抗体[EPR13540](ab183712)
巢蛋白:重组抗巢蛋白抗体 [SP103](ab105389)
尼卡斯特林:重组抗尼卡斯特林抗体[EPR2575Y](ab68145)
第5页:重组抗PAX5型抗体[EPR3730(2)](ab109443)
P(P)-糖蛋白:重组抗 P(P)糖蛋白抗体 【EPR10364-57】-不含 英国标准协会和叠氮化物 (约216656)
突触蛋白我:重组抗突触蛋白 我(磷酸 第553页)抗体 [E377](ab32532)
突触素:重组抗突触素抗体 [YE269](ab32127)
星形胶质细胞
GFAP公司:重组抗GFAP公司抗体[EPR1034Y](ab68428)
EAAT1:重组抗EAAT1公司抗体[EPR12686](ab181036)
EAAT2:重组抗欧洲原子能机构2抗体[EPR19794](ab205247)
S100β:重组抗S100β抗体[EP1576Y](ab52642)
ALDH1L1:重组抗ALDH1L1型抗体[EPR12743(B)](ab177463)
少突胶质细胞
NG2: 重组抗天然气2抗体[EPR9195](ab139406)
奥利格1:抗奥利格1抗体[EPR6790](ab124908)
少突胶质细胞特异性蛋白 (OSP):重组抗少突胶质细胞特异性蛋白抗体 [EPR12726](ab175236)
髓鞘碱性蛋白(MBP):重组抗髓鞘碱性蛋白抗体 [IGX3421](ab209328)
髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG):重组抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体 [EPR4282](ab108505)
Sox10:重组抗SOX10标准抗体[EPR4007-104](ab180862)
胰高血糖素:重组抗胰高血糖素抗体 [EP3070](ab92517)
胰岛素:重组抗胰岛素抗体 [EPR17359](ab181547)
胰岛素-1:重组抗胰岛 1抗体 [EP4182](ab109517)
胰多肽:重组抗胰多肽抗体 [EPR22853-61](ab255827)
PDX-1: 重组抗PDX1(PDX1)抗体[EPR3358(2)](ab134150)
甲胎蛋白: 重组抗-α1甲胎蛋白抗体 [EPR9309](ab169552)
白蛋白:重组抗白蛋白抗体 [EPSISR1](ab137885)
HNF-1α:重组抗HNF1α抗体[EPR23054-142](ab242140)
Tat-SF1:重组抗Tat-SF1型抗体[EPR9105(B)](ab134921)
α-辅肌动蛋白: 重组抗肌节 α 辅肌动蛋白抗体 [EP2529Y](ab68167)
心肌肌钙蛋白我: 钙钙我抗体 [EP1106Y](ab52862)
心肌肌钙蛋白吨: 重组抗心肌肌钙蛋白 T型抗体 [EPR3695](ab91605)
GATA6:重组抗加塔6抗体[EPR3990(N)](ab175927)
肌细胞生成素:重组抗肌细胞生成素抗体 [EPR4789](ab124800)
Nkx2.5: 重组抗牛顿x2.5抗体[EPR20168](ab205263)
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