主要功能和细节
表达系统:HEK 293细胞 纯度:>=95%SDS-PAGE 内毒素水平:<0.005 Eu/µg 激活:是 适用于:夹心ELISA、细胞培养、功能研究、MS、HPLC、SDS-PAGE
描述
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产品名称 -
生物活性 与标准相比,具有完全生物活性。 ED公司 50 根据L-929细胞的剂量依赖性杀伤/凋亡为0.71ng/mL,对应于1.41 x 10的比活性 6 单位/毫克。 -
纯度 >= 95 %SDS-PAGE电泳。 >=95%HPLC。 -
内毒素水平 <0.005 Eu/微克 -
表达系统 HEK 293细胞 -
加入 -
蛋白长度 全长蛋白质 -
无动物成分 是的 -
无障碍 是 -
性质 重组 -
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种属 人类 -
序列 VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRANALLANGVELRDNQLVV PSEGLYYSQVLFKGQGCPSTHVLTISRIAVSYQTKVNLSAIKSP CQRETPEGAEAKPWYEPIYLGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQV YFGIIAL公司 -
预测分子量 17千Da -
氨基酸 77至233 -
额外的序列信息 全长成熟链可溶性形式。N-末端甘氨酸。
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技术指标
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美国 夹心ELISA 细胞培养 功能研究 质谱法 高效液相色谱法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
中国 冻干的 -
补充说明 这种蛋白质在等分和冷冻干燥之前经过过滤灭菌。 所有制脂和冻干步骤均在无菌环境中进行 -
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制备和贮存
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稳定性和存储 在室温下装运。 在室温下储存。 pH值:6.00 成分:0.727%磷酸二氢钾、0.248%磷酸二氢钾、10.26%海藻糖 缓冲液冻干自。 该产品是一种活性蛋白,可能会在体内引起生物反应,请谨慎处理。 -
复溶 用磷酸盐缓冲盐重组。 重组蛋白在-80摄氏度下稳定12个月或在4摄氏度下稳定1周。 冻干内容物可能呈现为半透明膜或白色粉末。 这种差异不会影响产品的质量。
常规信息
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别名 APC1接口 APC1蛋白 卡西汀
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功能 与TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR结合的细胞因子。主要由巨噬细胞分泌,可诱导某些肿瘤细胞系的细胞死亡。 它是一种通过直接作用或刺激白细胞介素-1分泌而引起发热的强效热原,与恶病质的诱导有关。在某些条件下,它可以刺激细胞增殖和诱导细胞分化。 -
疾病相关 TNF的遗传变异是银屑病关节炎(PSORAS)易感性的一个原因[MIM:607507]。 PSORAS是一种与银屑病相关的炎症性、血清阴性关节炎。 这是一种异质性疾病,从轻微的非破坏性疾病到严重的进行性侵蚀性关节病。 银屑病关节炎有五种类型:以手指或脚趾小关节为主的不对称性少关节炎; 涉及四肢关节的不对称性关节炎; 对称性多发性关节炎,其特征是手、腕、踝和脚可能出现类风湿样改变; 多发性关节炎,这是一种罕见的畸形和破坏性疾病; 骶髂关节和脊柱关节炎(银屑病性脊柱炎)。 -
序列相似性 属于肿瘤坏死因子家族。 -
翻译后修饰 可溶性形式来源于通过蛋白水解过程形成的膜形式。 膜形式,而不是可溶性形式,在丝氨酸残基上磷酸化。 膜形式的去磷酸化通过与可溶性TNFRSF1A/TNFR1结合发生。 O-糖基化; 聚糖包含半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰神经氨酸。 -
细胞定位 分泌膜和细胞膜。 -
UniProt提供的信息
图片
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野生型A549控制细胞或IP-10敲除A549细胞( 约266969 )生长到40%融合,用重组人干扰素γ蛋白刺激( ab259377号 )浓度为100 ng/ml,重组人TNFα蛋白(ab259410)浓度为10 ng/ml或载体对照16或32小时。 用重组人干扰素γ蛋白刺激生长到40%融合的THP-1细胞( ab259377号 )浓度为200 ng/ml,LPS浓度为50 ng/ml或溶媒对照24小时。 使用人IP-10 ELISA试剂盒,重复测量细胞培养上清液中IP-10(CXCL10)的浓度,并根据IP-10标准曲线进行插值( 公元173194年 ) . 在未稀释的上清液中测量来自车辆对照样品的IP-10,并将处理过的样品稀释200倍。 绘制插值稀释因子校正值(平均值+/-SD,n=2)。 -
与标准相比,具有完全生物活性。 ED公司 50 L-929细胞的剂量依赖性杀伤/凋亡为0.71 ng/mL,对应于1.41 x 10的比活性 6 单位/毫克。 -
ab259410的SDS-PAGE分析。 -
夹心ELISA-重组人TNFα蛋白标准曲线。 使用人TNF-α抗体对-BSA和无叠氮化合物的背景减去标准曲线( 约241791 )和重组人TNF-α蛋白(活性)(ab259410)。 ELISA使用相应SimpleStep®试剂盒的成分进行,该试剂盒使用相同的抗体对和不同的配方和格式。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和VCAM1敲除A549细胞(红线, 约273758 ),用10ng/ml TNF-α处理16小时(左)和未处理(右),用 约103173 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再进行抗体( 约103173 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 以与一级抗体相同的浓度和条件(野生型A549-黑线VCAM敲除A549-灰线)使用同种对照抗体小鼠IgG1κ别藻蓝蛋白。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用40 mW红色激光器(638nm)和660/10带通滤波器采集了5000多个事件。 -
所有车道: 抗IP10抗体[EPR20764]( 约214668 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y( ab259377号 )(100纳克/毫升,32小时)和TNF-α(ab259410)(10纳克/毫克,32小时( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10淘汰赛A549 IFN-y( ab259377号 )(100ng/ml,32h)和TNF-α(ab259410)( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 车道5: THP-1布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道6: THP-1干扰素-y( ab259377号 )(200ng/ml,24h)和LPS(50ng/ml、24h)-处理24小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-6车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约214668 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约214668 western blot显示在野生型A549细胞中与IP10反应,在IP10敲除细胞系中观察到信号丢失 约266971 (敲除细胞裂解物 约256888 ). 对野生型和IP10敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约214668 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IP10抗体[EPR7850]( 约137018 )稀释1/500 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y( ab259377号 )(100 ng/ml,32小时)和TNF-α(ab259410)(10 ng/ml)持续32小时,以及布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10淘汰赛A549 IFN-y( ab259377号 )(100 ng/ml,32小时)和TNF-α(ab259410)(10 ng/ml)持续32小时,以及布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约137018 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约137018 western blot显示与A549野生型细胞中的IP10反应,在IP10敲除细胞系中观察到信号丢失 约266969 (IP10敲除细胞裂解物 约256886 ). 对A549野生型和IP10敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约137018 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯度:100% 使用带有DAD的1260 Infinity II HPLC系统和MabPac RP柱(3.0x100 mm,4µm)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,并在3分钟内从80%的水:TFA(99.9:0.1 v/v)和20%的乙腈:水:TFA(90:9.9:0.1 v/v/v。 流速为0.5 mL/min,柱室温度为50°C。 -
M+0.2 Da(计算质量17409.8 Da) 使用6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF(安捷伦科技公司)和MabPac RP色谱柱(42.1x50 mm,4µm,Thermo Scientific)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,梯度在3分钟内从85%的水:FA(99.9:0.1 v/v)和15%的乙腈:FA。 流速为0.4 mL/min,柱室温度为60°C。 使用Bioconfirm软件(安捷伦科技公司)对数据进行分析和反褶积。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (5)
罗伊 等。 表皮生长因子受体的药理抑制通过调节血管平滑肌细胞的表型减轻颅内动脉瘤的形成。 CNS神经科学疗法 28:64-76 (2022). 公共医学:34729926 王C 等。 Hsa_circ_0031608:颅内动脉瘤破裂中VSMC表型的一种潜在调节剂。 前臼齿神经科学 15:842865 (2022). 公共医学:35359572 陈杰 等。 靶向中性粒细胞脂质体通过吸附促炎细胞因子和调节免疫微环境促进心脏修复。 纳米生物技术杂志 20:218 (2022). 公共医学:35525963 崔永杰(Choi YJ) 等。 MicroRNA-155通过抑制白细胞介素-2诱导的T细胞激酶在Graves眼眶病眼眶成纤维细胞中发挥抗炎因子的作用。 公共科学图书馆一号 17:e0270416(2022)。 公共医学:35980936 张X 等。 替米沙坦通过上调SOX-9缓解TNF-a诱导的II型胶原减少。 ACS欧米茄 6:11756-11761 (2021). 公共医学:34056329