主要功能和细节
表达系统:HEK 293细胞 纯度:>95%SDS-PAGE 内毒素水平:<=0.005 Eu/µg 激活:是 适用于:夹心ELISA、细胞培养、SDS-PAGE、功能研究、MS、HPLC
描述
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产品名称 -
生物活性 与标准相比,具有完全生物活性。 教育部 50 ≤0.7399 ng/ml,对应于1.35 x 10的比活性 6 单位/mg -
纯度 > 95 %SDS-PAGE电泳。 HPLC测定纯度>=95%。 -
内毒素水平 <=0.005 Eu/微克 -
表达系统 HEK 293细胞 -
加入 -
完 全长蛋白质 -
无动物成分 是的 -
无载体 是 -
(古希腊语) 重组 -
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种属 人类 -
序列 肾功能衰竭 GLKEKNLYS CVLKDDKPTL QLESVDPKNY PKKKMEKRFV FNKIEINNKL EFESAQFPNW公司 YISTSQAENM PVFLGGTKGG QDITDFTMQF VSS公司 -
预测分子量 17千Da -
分子量信息 M+1.02 Da(计算值MW17433.98 Da) -
氨基酸 117至269 -
额外的序列信息 N-末端甘氨酸。 缺乏前肽的全长成熟链。
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技术指标
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应用 夹心ELISA 细胞培养 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 功能研究 质谱法 高效液相色谱法 -
形式 冻干的 -
补充说明 这种蛋白质在加脂和冷冻干燥之前经过过滤消毒。 所有制脂和冻干步骤均在无菌环境中进行 -
浓度信息加载。。。
制备和贮存
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稳定性和存储 在室温下装运。 在室温下储存。 pH值:6.00 成分:0.727%磷酸二氢钾,0.248%磷酸二氢钾,10.26%海藻糖 缓冲液冻干。 该产品是一种活性蛋白,可能会在体内引起生物反应,请谨慎处理。 -
复溶 在PBS中重新配制,等分并在-80℃下保存12个月或在4℃下保存1周。 避免反复冻融。 冻干内容物可能呈现为半透明膜或白色粉末。 这种差异不会影响产品的质量。
常规信息
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别名 分解蛋白 H1型 干扰素β诱导因子
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功能 有效的促炎细胞因子。 最初发现作为主要内源性热原,可诱导前列腺素合成、中性粒细胞内流和活化、T细胞活化和细胞因子生成、B细胞活化和抗体生成、成纤维细胞增殖和胶原生成。 促进T细胞的Th17分化。 -
组织特异性 在激活的单核细胞/巨噬细胞中表达(蛋白质水平)。 -
序列相似性 属于IL-1家族。 -
翻译后修饰 IL1B前体的激活涉及CASP1催化的蛋白水解裂解。 加工和分泌暂时相关。 -
细胞定位 细胞质,胞浆。 溶酶体。 秘密的外泌体。 细胞质小泡,自噬体。 保密。 前体是胞质的。 响应炎症小体激活信号,如NLRP3炎症小体的ATP或NLRC4炎症小体的细菌鞭毛蛋白,裂解并分泌。 IL1B缺乏任何已知的信号序列,其分泌途径尚不完全清楚(PubMed:24201029)。 根据实验结果,提出了几种非常规分泌机制。 1.通过分泌性溶酶体分泌:CASP1和IL1B前体的一部分可能通过一种尚未明确的机制并入分泌性溶菌体,该溶酶体经历钙(2+)依赖性胞吐,释放成熟IL1B(PubMed:15192144)。 2.分泌性自噬:含有IL1B的自噬体可能与内切体或多泡体(MVB)融合,然后与释放可溶性IL1B或含IL1B外切体的质膜融合(PubMed:24201029)。 然而,自噬在多个水平上影响IL1B的产生,其在分泌中的作用仍有争议。 3.通过外泌体分泌:P2RX7的ATP激活导致包含外泌物的MVB与IL1B、CASP1和其他炎性体成分包裹在一起。 这些MVB随着外泌体的释放而发生胞吐。 可溶性IL1B的释放发生在外体膜的裂解之后(根据相似性)。 4.微泡脱落分泌:ATP受体P2RX7的激活可诱导含有IL1B和可能的炎性体成分的膜源性微泡立即脱落。 微泡溶解后,细胞因子在细胞外室释放(PubMed:11728343)。 5.通过透性质膜转位释放。 这可能发生在因炎症小体持续激活而发生细胞凋亡的细胞中(通过相似性)。 这些机制可能并不相互排斥。 -
UniProt提供的信息
图片
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与标准相比,具有完全生物活性。 教育部 50 ≤0.7399 ng/ml,对应于1.35 x 10的比活性 6 单位/mg -
ab259387的SDS-PAGE分析。 -
纯度:100% 使用带有DAD的1260 Infinity II HPLC系统和MabPac RP柱(3.0x100 mm,4µm)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,梯度在3分钟内从80%水:TFA(99.9:0.1 v/v)和20%乙腈:水:TFA(90:9.9:0.1 v/v/v)到20%水:TFA(99.9:0.1 v/v)和80%乙腈:水:TFA(90:9.9:0.1 v/v/v),然后再进行3分钟的等度步骤。 流速为0.5 mL/min,柱室温度为50°C。 -
M+1.02 Da(计算质量17433.98) 使用6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF(安捷伦科技公司)和MabPac RP色谱柱(42.1x50 mm,4µm,Thermo Scientific)记录光谱。 注入5µL纯化蛋白,梯度在3分钟内从85%的水:FA(99.9:0.1 v/v)和15%的乙腈:FA。 流速为0.4 mL/min,柱室温度为60°C。 使用Bioconfirm软件(安捷伦科技公司)对数据进行分析和反褶积。 -
所有车道: 抗IL-6抗体[EPR21711]( ab233706型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IL-1ß(ab259387)(20 ng/ml,24h)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 车道3: IL-6基因敲除物A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道4: IL-6敲除物A549 IL-1ß(ab259387)(20 ng/ml,24h)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 其他波段位于: 40 kDa(可能的非特异性结合) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab233706型 在25 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 ab233706型 western blot显示与野生型A549细胞中的IL-6反应,在IL-6敲除细胞系中观察到信号丢失 约273751 (敲除细胞裂解物 ab275501号 ). 对野生型和IL-6敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 ab233706型 和 约7291 (小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释度分别为1/1000和1/2000。将印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IL-6抗体[EPR20653]( 约214429 )稀释1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IL-1ß(ab259387)(20 ng/ml,24h)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 车道3: IL-6基因敲除物A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道4: IL-6敲除物A549 IL-1ß(ab259387)(20 ng/ml,24h)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 其他波段位于: 35 kDa(可能的非特异性结合) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 邮编:214429 在25 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约214429 western blot显示与野生型A549细胞中的IL-6反应,在IL-6敲除细胞系中观察到信号丢失 约273751 (敲除细胞裂解物 ab275501号 ). 对野生型A549和IL-6敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约214429 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
使用人IL-1β抗体对-BSA和无叠氮化合物的背景减去标准曲线( 约241807 )以及夹心ELISA中的重组人IL-1β蛋白(活性)(ab259387)。 使用相应SimpleStep的成分进行ELISA ® 试剂盒,它使用相同的抗体对,具有不同的配方和格式。
实验方案
数据表及文件
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