伊格，克罗姆尼[EPR25A]-艾力克（Alexa Fluor®488）（ab199091）

重叠直方图显示HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞染色ab198978号（红线）。然后用0.0%甘氨酸与10.3%甘氨酸的特异性抗体和10.0%甘氨酸/甘氨酸细胞相互作用(ab198978号，1/500稀释），在22℃下保持30分钟。

同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）Alexa Fluor^®488（ab199091）在与原抗体相同的浓度和条件下使用。未标记样本（蓝线）也被用作对照。

用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了大于5000个事件。

重叠直方图显示用ab199091染色的HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞，使用不同的固定和渗透。细胞固定，清洗和渗透如下所示；

4%甲醛（10分钟，室温）/0.1%PBS Triton X-100（15分钟，室温）

80%甲醇（5分钟，-20°C）/0.1%PBS Triton X-100（15分钟，室温）

4%甲醛（10分钟，室温）/90%甲醇（30分钟，-20°C）

然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清中以阻断非特异性蛋白质相互作用，然后在22℃下以以下浓度-蓝线（未标记）、黑线（0.1μg/ml）、红线（1μg/ml）和绿线（10μg/ml）在22℃下持续30分钟。

用48nm/a的激光滤光片采集了大于50nm/50nm的事件。

4%甲醛（10min）固定人宫颈腺癌HeLa细胞的免疫荧光分析。然后用正常人血清0.3M/100%甘氨酸（10%ab1/199.3M）与正常对照组（ab1/1）孵育1hab195889号，小鼠对α-微管蛋白的单克隆抗体（Alexa Fluor^®594），稀释1/250（红色假彩色）。DNA标记为蓝色。

这张照片是用共焦显微镜（徕卡微系统公司，TCSP8）拍摄的。

用100%甲醇（5min）固定HeLa细胞，在相同的检测条件下，本品也呈阳性信号。

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用PI双染色和单克隆CRT抗体检测CRT。培养24小时后，用PBS洗涤细胞，用200µL accutase分离，用2 mL FACS缓冲液（500 mL鞘液+2 g牛血清白蛋白+1 g NaN）洗涤两次_三100毫升小时₂O） 一。将每个样本分成两个小瓶，其中一个用单克隆兔抗CRT抗体（Abcam）染色，ab196158)另一组用兔IgG、单克隆同型对照（Abcam，ab199091）在4℃下染色40分钟，然后用FACS缓冲液冲洗细胞一次。在用流式细胞仪定量之前，立即向每个样品中添加0.5µL的PI。收集了15000个事件，仅分析了PI细胞表面CRT的表达。使用FlowJo软件（FlowJo有限责任公司，版本10）对数据进行分析和选通。数据以CRT阳性百分率表示，在考虑到与它们相应的同型的非特异性结合后。