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将叠氮化钠从抗体溶液中去除的具体步骤
打印该实验方案。
叠氮化钠是一种用于抑制污染物(如细菌或真菌)生长的防腐剂。然而,它在抗体溶液中的存在会影响细胞培养过程中抗体的使用,因为它有细胞毒性。它还会干扰抗体和偶联物的偶联,以及抑制辣根过氧化物酶的活性。
许多阿布卡姆抗体产品含有叠氮化钠,这个信息是在各个抗体的数据表上都会列出。如果该抗体是用于细胞培养实验或需要偶联,建议从抗体溶液中去除叠氮化钠。
下面的三个步骤可以用来除去叠氮化钠。
分析0.1毫升到70毫升的样品中的叠氮化钠去除。这是一种半透膜,可以选择较宽范围的不同大小尺寸和孔径大小。使用一个孔径大小可以截留10-30kDa大小以上物质的膜将允许叠氮化物通过膜,但在溶液中将保留抗体和其他蛋白。
免疫球蛋白G的分子量为150千Da(IgM为600kDa)叠氮化钠的分子量是65天
所需材料
步骤
如果可能的话,所有的材料都应该消毒,并相应的准备操作保持无菌。由于抗体不再受防腐剂的保护,因而推荐将抗体保持在低温条件。
脱盐
该步骤适用于体积较小的1-3毫升,脱盐柱有尺寸排阻性,由具有一定孔隙大小的小颗粒组成。
尺寸排阻是一种根据分子量来分离溶液中分子的方法。不同分子量的粒子将以不同速率通过尺寸排阻基质洗脱下来。例如,大分子不能进入基质的孔隙,因此首先被洗脱下来,而较小的分子则会渗入珠子而最后才被洗脱下来。
葡聚糖凝胶G25系统等葡聚糖凝胶离心柱是现成的,可用于此过程。
所需材料
葡聚糖凝胶G25离心柱
平衡缓冲液
(德国)
步骤
商业化的抗体纯化试剂盒也可被用于除去叠氮化钠。
下面的阿布卡姆试剂盒可用于从含有BSA、甘氨酸、特里斯或叠氮化钠的抗体溶液中纯化抗体。它也可以用来纯化来自粗品的抗体,如腹水或免疫血清。
该方法涉及了在蛋白质A树脂上捕获抗体,以及通过一个简单的洗涤步骤去除不需要的物质,这可以用标准的微量离心机来完成。然后,洗脱并中和纯化产物。
查看约102784抗体纯化试剂盒的数据表(3倍纯化)。