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在印迹前后去除蛋白质中的磷酸基团。
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为了证明抗体对处于磷酸化状态的蛋白质的特异性,蛋白质可以在SDS-PAGE之前或转移到膜后去磷酸化。与未经处理的样品相比,脱磷样品应显示很少或没有染色。
材料
小牛肠碱性磷酸酶(CIP)CIP缓冲液:100 mM NaCl、50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2,1 mM二硫苏糖醇,25ºC时pH至7.9蛋白酶抑制剂混合物,不含EDTA
对于在蛋白质变性时仅结合其磷酸蛋白靶点的抗体,用磷酸酶后转移处理膜可能比用磷酸酶前SDS-PAGE处理非变性裂解物更好。为了进行良好的对照,用磷酸酶处理的膜应该是从含有一条或多条重复线的单个凝胶的斑点上切下的一块。
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