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当抗体需要进入细胞内部以检测靶抗原时,需要对其进行透化处理。
这类抗原包括细胞内蛋白和跨膜蛋白的胞质表位。溶剂或洗涤剂通常用于进行透化处理。
采用甲醛等交联剂固定后,可以使用溶剂进行透化处理。推荐用于细胞骨架、病毒和一些酶抗原。
部分洗涤剂比较刺激,可能会破坏蛋白质(如 Triton™X-100或Np-40)也有部分洗涤剂较温和,无法溶解质膜(如 吐温20®、皂苷或毛地黄皂苷)。洗涤剂透化处理可显著改善抗体对细胞质中抗原、质膜胞质面抗原和可溶性核抗原的获取。
溶剂和洗涤剂指南
溶剂
备注
丙酮
完
甲醇固定可进行透化处理,但有时可能会无效
中国
Triton™X-100或NP-40型
在 美国公共广播电视公司中添加浓度为 0.1% 至 0.2% 的该溶剂,仅需 10分钟
吐温20®皂苷、毛地黄皂苷和 白细胞组
添加浓度为 0.2% 至 0.5% 的溶剂,10至 30分钟
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吐温20®是 禾大美洲的注册商标。Triton®声波风廓线仪是 陶氏化学公司的商标。