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BrdU(溴脱氧尿苷/5-溴-2’-脱氧尿嘧啶)是用于鉴定增殖细胞的核苷胸腺嘧啶的类似物。
打印此协议可以执行BrdU标记在体外细胞系和原代细胞培养,或体内用于标记活动物体内的细胞。在BrdU分析过程中,BrdU被纳入复制DNA中,并且可以使用抗BrdU抗体进行检测。
BrdU标记后,在固定和渗透后可能需要额外的DNA水解步骤(有时称为DNA变性步骤),以允许抗BrdU抗体进入DNA中的BrdU。
我们建议使用我们的约6326BrdU抗体。该产品已在数百种出版物中被引用,并由我们的客户以平均五星评级进行独立审查。克隆及其结合物是在内部制造的。
如果您需要对BrdU的组织掺入进行阳性对照,请考虑BrdU控制滑块ab129956.
BrdU抗体可以与诸如双皮质素、和NeuN公司鉴定增殖细胞和新分化神经元。
为了快速、方便地获得结果,我们还建议BrdU染色IHC试剂盒它包含了对含有BrdU的细胞或组织进行染色所需的所有试剂。或者考虑BrdU ELISA试剂盒用于定量测量BrdU掺入,无需成像。
EdU染色是一种替代方法,具有比BrdU所需的更短、更简单的协议。
有几种标记细胞的方法体内使用BrdU。两种常用的方法是腹腔注射和口服。
腹膜内注射
注:注射后30分钟即可检测到BrdU掺入快速分裂的组织,如小肠。然而,对于大多数纸巾,您可能需要等待长达24小时。确切的治疗时间和剂量需要针对您感兴趣的组织进行优化。
口服
口服BrdU是一种非侵入性程序,因此对于长期服用BrdU很有用,尽管由于缺乏对动物耗水量的控制,这可能会给实验带来变化。
注:对于小鼠,每天225 mg/kg的BrdU(通过测量每只动物的耗水量计算)应能达到足够的BrdU标记。然而,确切的剂量应该针对个体实验条件进行优化。
准备硼酸钠缓冲液:3.8g硼酸钠(MW=381.4)+100 ml蒸馏水。用氢氧化钠调节pH。
细胞
组织切片
注:如果使用石蜡嵌段,请确保在继续操作之前将其脱蜡。请阅读我们的脱蜡协议。
注:一些研究人员报告称,他们没有执行HCl水解步骤,只是在继续免疫染色之前执行热诱导表位检索。
BrdU可以与其他抗体一起用于识别增殖和新分化神经元。我们的建议见下文。Ki67号机组Ki67蛋白是增殖的细胞标志物,在周期G1、S、G2和M期的细胞中存在,但在静止(G0)细胞中不存在。Ki67抗体可以代替或与BrdU联合用于标记增殖神经元。
阅读更多关于我们的敲除有效Ki67抗体的信息。
双皮质素由未成熟神经元表达的微管相关磷蛋白。双皮质激素抗体可与BrdU联合用于鉴定未成熟的有丝分裂后神经元。
浏览我们的双皮质激素抗体。
NeuN公司一种成熟神经元的标记物,可结合BrdU染色来识别新分化神经元。
了解NeuN-RabMAb®抗体的优点
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