主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR3507]到HMGB1 适用于:流式细胞周期(内部)、ICC/IF、WB、IHC-P 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EPR3507]至HMGB1 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:SK-BR-3、HeLa、HepG2、Jurkat和野生型HAP1全细胞裂解物; 大鼠脑组织裂解物。 IHC-P:人体肾脏和扁桃体组织。 ICC/IF:DU 145、HeLa、HAP1野生型和RAW 264.7细胞。 流式细胞周期(内部):HeLa和Hap1细胞。
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规则说明 该产品是一种重组单克隆抗体,具有以下优点: -高批次一致性和再现性 -提高敏感性和特异性 -长期供应安全 -无动物制作
有关更多信息 请看这里 . 我们的RabMAb ® 该技术是一种基于杂交瘤的专利技术,用于制备兔单克隆抗体。 有关我们专利的详细信息,请参阅 RabMAb公司 ® 专利 .
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 在-20°C下稳定12个月。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:PBS、40%甘油、0.05%牛血清白蛋白 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
协调 EPR3507型 -
同种型 免疫球蛋白G -
新冠肺炎疫苗
相关产品
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替代版本 Alexa Fluor®488抗-HMGB1抗体[EPR3507]( ab195010年 ) Alexa Fluor®647抗-HMGB1抗体[EPR3507]( 大约195011年 ) HRP抗-HMGB1抗体[EPR3507]( ab195012年 ) Alexa Fluor®594抗-HMGB1抗体[EPR3507]( 约206894 ) Alexa Fluor®405抗-HMGB1抗体[EPR3507]( 约206895 ) Alexa Fluor®555抗-HMGB1抗体[EPR3507]( ab206896年 ) 抗-HMGB1抗体[EPR3507]-BSA和无叠氮化合物( 约216986 ) APC抗-HMGB1抗体[EPR3507]( ab225041号 ) PE抗-HMGB1抗体[EPR3507]( ab225042号 ) APC抗-HMGB1抗体[EPR3507]( 约316300 )
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兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
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应用
靶标
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功能 多功能氧化还原敏感蛋白,在不同的细胞隔室中具有不同的作用。 细胞核中是主要的染色质相关非组蛋白之一,作为DNA伴侣参与复制、转录、染色质重塑、V(D)J重组、DNA修复和基因组稳定性。 建议成为一种通用的核酸生物传感器。 促进宿主对无菌和感染信号的炎症反应,并参与先天性和适应性免疫反应的协调和整合。 细胞质中作为免疫原核酸的传感器和/或伴侣,涉及TLR9介导的免疫反应的激活,并介导自噬。 作为危险相关分子模式(DAMP)分子,在组织损伤期间增强免疫反应。 释放到细胞外环境可以结合DNA、核小体、IL-1β、CXCL12、AGER亚型2/sRAGE、脂多糖(LPS)和脂磷壁酸(LTA),并通过多种表面受体的参与激活细胞。 在细胞外室中,完全减少的HMGB1(由坏死释放)作为趋化因子,二硫键HMGB1作为细胞因子(积极分泌),磺酰HMGB1则(由凋亡细胞释放)促进免疫耐受(PubMed:23519706,PubMed:33446148,PubMet:23994764,PubMer:25048472)。 具有促血管生成活性(根据相似性)。 可能参与血小板活化(根据相似性)。 与磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇酰胺结合(通过相似性)。 与RAGE结合介导神经元生长信号(通过相似性)。 可能在扩增的聚谷氨酰胺(polyQ)蛋白如亨廷顿蛋白(HTT)或TBP的积累中发挥作用(PubMed:223303669,PubMed:25549101)。 核功能归因于HGMB1的完全降低。 与染色质结合并结合DNA,优先选择非标准DNA结构,如单链DNA、含DNA的十字形或弯曲结构、超螺旋DNA和ZDNA。 可以弯曲DNA并通过环化增强DNA的灵活性,从而通过增强转录因子结合和/或使远程调控序列接近,提供一种机制来促进各种基因启动子的活性(PubMed:20123072)。 可能在核苷酸切除修复(NER)中起增强作用(通过相似性)。 然而,使用体外系统在NER中的效果却有矛盾的报道(PubMed:19446504,PubMed:19360789)。 可能参与错配修复(MMR)和基底切除修复(BER)通路(PubMed:15014079,PubMed:16143102,PubMet:17803946)。 可能参与双绞线断裂修复,如非同源端接(NHEJ)(通过相似性)。 通过充当RAG复合物的辅因子参与V(D)J重组:通过刺激切割和RAG蛋白在保守重组信号序列(RSS)的23bp间隔区结合起作用(通过相似性)。 体外可以从高度弯曲的DNA中置换组蛋白H1(根据相似性)。 可以重组标准核小体,导致转录因子结合的结构约束放松(通过相似性)。 增强固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)(如SREBF1)与其同源DNA序列的结合,并增加其转录活性(通过相似性)。 促进TP53与DNA的结合(PubMed:23063560)。 建议以与HSPB1相关的转录依赖方式参与线粒体质量控制和自噬; 然而,这一功能受到了质疑(通过相似性)。 可以调节端粒酶复合体的活性,并可能参与端粒的维持。 在细胞质中,建议通过与BECN1的竞争性相互作用分离BECN1:BCL2复合物,导致自噬激活(PubMed:20819940)。 参与氧化应激介导的自噬(PubMed:21395369)。 可以保护BECN1和ATG5免受钙蛋白酶介导的分裂,从而控制其促自噬和促凋亡功能,并调节炎症相关细胞损伤的程度和严重程度(通过相似性)。 在髓系细胞中,通过促进自噬对内毒素血症和细菌感染具有保护作用(通过相似性)。 参与巨噬细胞对CpG-DNA的反应中TLR9的内体移位和激活。 细胞外室(主动分泌或被动释放后)参与炎症反应的调节。 完全降低的HGMB1(释放后会被氧化)与CXCL12相关,在组织损伤的初始阶段介导炎症细胞的募集; CXCL12:HMGB1复合物触发CXCR4同源二聚(PubMed:22370717)。 诱导单核细胞衍生的未成熟树突状细胞的迁移,并似乎调节与AGER/RAGE和ITGAM相关的中性粒细胞的粘附和迁移功能(通过相似性)。 可结合各种类型的DNA和RNA,包括微生物非甲基化CpG-DNA,以增强对核酸的先天免疫反应。 建议在混杂的DNA/RNA传感中发挥作用,该传感与特定模式识别受体随后的区分传感相配合(通过相似性)。 促进与AGER/RAGE相关的细胞外DNA诱导的AIM2炎症小体激活(PubMed:24971542)。 二硫HMGB1与跨膜受体结合,如AGER/RAGE、TLR2、TLR4和可能的TREM1,从而激活其信号转导途径。 调节细胞因子/趋化因子的释放,如TNF、IL-1、IL-6、IL-8、CCL2、CCL3、CCL4和CXCL10(PubMed:12765338,PubMed:18354232,PubMet:19264983,PubMed:20547845,PubMed:24474694)。 促进巨噬细胞刺激的自然杀伤(NK)细胞与其他细胞因子如IL-2或IL-12协同分泌干扰素-γ(PubMed:15607795)。 TLR4被认为是促进巨噬细胞活化的主要受体,通过TLR4进行信号传递似乎与LY96/MD-2有关(PubMed:20547845)。 在细菌LPS或LTA介导的炎症反应中,炎症反应与内毒素结合,并将其转移到CD14,以向相应的TLR4:LY96和TLR2复合物发出信号(PubMed:18354232,PubMed:21660935,PubMet:25660311)。 通过与ACER/RAGE的关联促进肿瘤增殖(通过相似性)。 可通过IL1R1:IL1RAP受体复合物结合IL1-beta和信号(PubMed:18250463)。 与A类CpG结合可激活与TLR9、MYD88和AGER/RAGE相关的浆细胞样树突状细胞中的细胞因子生成,并可激活自身反应性B细胞。 通过含HMGB1的染色质免疫复合物,还可以通过B细胞受体(BCR)依赖性和ACER/RAGE依赖性机制(通过相似性)促进B细胞对内源性TLR9配体的反应。 抑制巨噬细胞吞噬凋亡细胞; 该功能依赖于聚ADP核糖基化,并涉及与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合(通过相似性)。 适应性免疫可能通过激活效应T细胞和抑制调节性T(TReg)细胞来增强免疫(PubMed:15944249,PubMed:22473704)。 相反,在不涉及效应或调节性T细胞的情况下,表达淋巴毒素LTA:LTB异源三聚体的T细胞需要肿瘤浸润和激活,从而促进肿瘤恶性进展(通过相似性)。 也有报道限制T细胞增殖(根据相似性)。 释放HMGB1:凋亡过程中形成的核小体复合体可以通过TLR2发出信号,诱导细胞因子产生(PubMed:19064698)。 参与凋亡细胞诱导免疫耐受; 当凋亡细胞释放其促炎活性时,活性氧物种(ROS)依赖的氧化作用(特别是Cys-106)可中和其促炎作用(PubMed:18631454)。 在巨噬细胞活化过程中,活化的淋巴细胞衍生的自凋亡DNA(ALD-DNA)促进ALD-DNA向内体的募集。 -
组织特异性 无处不在。 以血小板表达(PubMed:11154118)。 -
序列相似性 属于HMGB家族。 包含2个HMG盒DNA绑定域。 -
结构域 HMG盒2介导促炎细胞因子刺激活性并与TLR4结合(PubMed:12765338,PubMed:20547845)。 然而,在凋亡诱导免疫耐受的背景下,不参与介导免疫原活性(PubMed:24474694)。 酸性C末端结构域形成一个柔性结构,可以与HMG盒在分子内可逆地相互作用,并调节与DNA和其他蛋白质的结合(PubMed:23063560)。 -
翻译后修饰 丝氨酸残基磷酸化。 NLS两个区域的磷酸化是细胞质易位和分泌所必需的(PubMed:17114460)。 LPS刺激后在多个部位乙酰化(PubMed:22801494)。 核定位信号(NLS1和NLS2)中赖氨酸残基的乙酰化导致细胞质定位和随后的分泌(通过相似性)。 Lys-3上的乙酰化导致优先结合DNA末端并削弱DNA弯曲活性。 半胱氨酸残基Cys-23、Cys-45和Cys-106的还原/氧化,以及可能的分子内二硫键,包括Cys-23和Cys-46,在不同的细胞隔室中产生具有特定功能活性的不同氧化还原形式:1-完全还原HMGB1(HMGB1C23hC45hC106h),2-二硫基HMGB1 和3-磺酰基HMGB1(HMGB1C23soC45soC106so)。 LPS刺激后分泌的PARP1可使多聚ADP-核糖化。 CASP1的体外切割是释放含有HMG盒1的肽,该肽可以介导免疫原性活性; 该肽拮抗凋亡诱导的免疫耐受(PubMed:24474694)。 可被凝血酶水解:血栓调节蛋白复合物; 减少与肝素的结合和促炎活性。 -
细胞定位 核心。 染色体。 细胞质。 保密。 细胞膜。 内体。 内质网-高尔基体中间隔室。 基态主要为核。 在细胞质和细胞核之间穿梭(PubMed:12231511,PubMed:17114460)。 在自噬刺激下从细胞核转移到细胞质(PubMed:20819940)。 巨噬细胞在细胞外环境中的释放需要激活NLRC4或NLRP3炎性体(根据相似性)。 通过扩散将坏死细胞被动释放至细胞外环境,包括完全还原的HGMB1,随后被氧化(PubMed:19811284)。 也由凋亡细胞释放(PubMed:16855214,PubMed:18631454)。 各种免疫细胞和非免疫细胞(如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞)对各种刺激(如脂多糖和细胞因子)的主动分泌涉及通过分泌溶酶体的非常规分泌过程(PubMed:12231511,PubMed:14532127,PubMet:15944249)。 血浆细胞对LPS的反应而分泌(通过相似性)。 发现于活化血小板表面(PubMed:11154118)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 3146 人类 Entrez基因: 100862258 鼠标 Entrez基因: 15289 鼠标 Entrez基因: 25459 老鼠 Omim公司: 163905 人类 瑞士保护银行: P09429 人类 瑞士保护银行: 第63158页 鼠标 瑞士保护银行: 第63159页 老鼠
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别名 两性激素抗体 染色体蛋白、非组蛋白、HMG1抗体 DKFZp686A04236抗体
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图片
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流式细胞术重叠直方图显示野生型Hap1(绿线)和HMGB1基因敲除Hap1用ab79823(红线)染色。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab79823)(1x 10 6 100μl,0.008μg/ml(1/260000)),22°C下30分钟。 将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同位素对照抗体重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型Hap1-黑线,HMGB1敲除Hap1-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50mW蓝色激光器(488nm)和525/40带通滤波器收集了>5000个事件的采集。 -
所有车道: 抗-HMGB1抗体[EPR3507](ab79823),稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: HMGB1 CRISPR/Cas9编辑的HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 30千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在30 kDa下观察到ab79823。 红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab79823与野生型HeLa细胞中的HMGB1反应。 当CRISPR/Cas9编辑细胞系时,观察到预期大小的信号丢失 约255395 (CRISPR/Cas9编辑的细胞裂解物 约263782 )已使用。 在25kDa以下的通道2中观察到的带可能代表截断形式和劈开碎片。 对野生型HeLa和HMGB1 CRISPR/Cas9编辑的HeLa细胞裂解液进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab79823和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
ab79823染色野生型HAP1细胞中的HMGB1(顶面板)和HMGB1敲除HAP1的细胞(底面板)。 细胞用4%甲醛固定10分钟,用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用ab79823以1/250的稀释度培养细胞,并 约195889年 以1/250稀释度(以伪红色显示)在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附剂进一步孵育1小时( 约150081 )2μg/ml的二级抗体(以绿色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
人类扁桃体组织用未纯化ab79823标记HMGB1(1/350)的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 使用Tris/EDTA缓冲液pH 9进行热介导抗原检索。 使用预先稀释的HRP聚合物结合的抗兔IgG作为二级抗体。 苏木精复染。 -
所有车道: 抗-HMGB1抗体[EPR3507](ab79823),稀释度为1/10000 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: HMGB1敲除HAP1全细胞裂解物 3号车道: Jurkat全细胞裂解物 车道4: HeLa全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 25千Da 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在30kDa下观察到ab79823。 红色-装载控制, 约9484 ,在37 kDa下观察到。 ab79823在野生型HAP1细胞中与HMGB1特异性反应,因为HMGB1敲除细胞中信号丢失。 对野生型和HMGB1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab79823和 约9484 (小鼠抗GAPDH负载对照)分别在1/10000稀释度和1/20000稀释度的4°C下孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
未经处理(上面板)或经LPS处理(下面板)的小鼠RAW 264.7巨噬细胞的免疫荧光分析。 HMGB1用未纯化的ab79823染色。 细胞固定在多聚甲醛中,在BSA中封闭1小时,然后在10%Triton X-100中渗透30分钟。样品在4°C下与一级抗体孵育过夜。 Alexa Fluor公司 ® 用488-结合的抗兔IgG作为二级抗体。 -
未纯化ab79823染色的DU 145(人前列腺癌细胞系)细胞的ICC/IF图像。 细胞经4%甲醛固定(10分钟),然后在1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1小时,以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 然后将细胞与抗体ab79823以1/1000的稀释度在+4°C下孵育过夜。 二级抗体(绿色)为DyLight ® 488山羊抗兔( ab96899年 )以1/1000稀释度使用IgG(H+L)1小时。 Alexa Fluor公司 ® 594 WGA用于标记1/200稀释1h的质膜(红色)。 DAPI用于染色浓度为1.43µM的细胞核(蓝色)。 -
HeLa细胞的免疫细胞电泳/免疫荧光分析,用未纯化的ab79823标记HMGB1(红色)(1/350)。 细胞用4%多聚甲醛固定。 Alexa Fluor公司 ® 用555结合的山羊抗兔IgG(1/200)作为二级抗体。 DAPI(蓝色)复染。 -
所有车道: 抗-HMGB1抗体[EPR3507](ab79823),1/10000稀释(纯化) 车道1: SK-BR-3(人乳腺癌细胞系)细胞裂解物 车道2: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 1/1000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗兔IgG(H+L) 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 25千Da 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 -
1/10000稀释(纯化)的抗-HMGB1抗体[EPR3507](ab79823)+10µg的大鼠脑组织裂解物 次要 1/1000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗兔IgG(H+L) 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 25千Da 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 -
所有车道: 1/50000稀释(未净化)的抗-HMGB1抗体[EPR3507](ab79823) 车道1: SK-BR-3细胞裂解物 车道2: HeLa细胞裂解物 3号车道: HepG2细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔HRP结合物1/2000稀释 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 25千Da -
用未纯化ab79823在1/250稀释度下标记HMGB1的人肾组织的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 在开始IHC染色方案之前,使用Tris/EDTA缓冲液pH 9.0进行热介导抗原回收。 -
叠加直方图显示用未纯化的ab79823染色的HeLa(来自宫颈腺癌的人上皮细胞系)细胞(红线)。 用甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab79823,1/20稀释)培养30分钟。 使用的二级抗体是DyLight ® 488山羊抗兔IgG(H+L)( 约96899 )在22°C下,1/500稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔单克隆IgG(0.5µg/1x10 6 细胞)在相同条件下使用。 采集了超过5000个事件。 在相同条件下使用4%多聚甲醛/0.1%PBS-Tween 20渗透固定的HeLa细胞中,该抗体发出的信号减弱。
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文献 (240)
李·H 等人。 γ-氨基丁酸对顺铂所致肾毒性中高盐摄入所致肾损伤加重的保护作用。 国际分子科学杂志 23:不适用(2022年)。 公共医学:35008928 Chin吉隆坡 等人。 HMGB1的细胞内易位对寨卡病毒在Huh7细胞中的复制至关重要。 科学代表 12:1054 (2022). 公共医学:35058496 沈J 等人。 MicroRNA-541-5p通过调节HMGB1的表达调节II型肺泡上皮细胞的增殖和活性。 休克 57:536-543 (2022). 公共医学:35271544 Oka K公司 等人。 通过抑制裸鼹鼠的炎症反应抵抗化学致癌诱导。 公共生物 5:287 (2022). 公共医学:35354912 胡C 等人。 痰热清注射液通过lncRNA-SNHG1/HMGB1轴减弱脂多糖诱导的急性肺损伤中的巨噬细胞活化和炎症反应。 前部免疫 13:820718 (2022). 公共医学:35547731