主要功能和细节
一次性90分钟协议 灵敏度:4.32 pg/ml 范围:15.63 pg/ml-1000 pg/ml 样本类型:细胞培养上清液、脑脊液、Cit血浆、EDTA血浆、Hep血浆、血清 检测方法:比色法 分析类型:三明治(定量) 反应对象:人类
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
精确度 批次内 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% PBMC媒体 8 2.5% 批次间 样品 n个 平均值 标准偏差 变异系数% PBMC媒体 三 3.1% -
样品类型 细胞培养上清液、血清、Hep血浆、EDTA血浆、Cit血浆、脑脊液 -
检测类型 三明治(定量) -
灵敏度 4.32微微克/毫升 -
范围 15.63微克/毫升- 1000微微克/毫升 -
回收率 特定样本回收率 样品类型 平均% 范围 细胞培养上清液 110 105% - 113% 血清 88 83% - 93% Hep血浆 98 89% - 110% EDTA血浆 100 95% - 104% Cit血浆 91 86% - 97% 脑脊液 83 80% - 88% -
检测时间 1小时 3000万 -
实验步骤 一步分析法 -
种属反应性 与反应: 人类 -
产品概述 人TNF-αELISA试剂盒(ab181421)是一种单洗90分钟夹心ELISA试剂,用于定量测定肿瘤坏死因子α蛋白 人血清、血浆和培养基。 它使用我们专有的SimpleStep ELISA®技术。 以4.32 pg/mL的灵敏度定量人TNFa。 SimpleStep ELISA®技术使用与亲和标签结合的捕获抗体,亲和标签被用于覆盖SimpleStepELISA®板的单克隆抗体识别。 这种夹心ELISA方法允许在一个步骤中形成抗体分析夹心复合物,显著缩短了分析时间。 有关更多详细信息,请参阅图像部分中的SimpleStep ELISA®协议摘要。 我们的SimpleStep ELISA®技术具有以下优点: -单次刷洗方案将分析时间缩短至90分钟或更短 -高级抗体的高灵敏度、特异性和再现性 -在生物样品中充分验证 -96块钢板可分解成12 x 8个井带
384孔单步ELISA®微孔板( 约203359 )可作为SimpeStep ELISA®试剂盒提供的96-well微孔板的替代品使用。
检测特异性 该试剂盒仅识别血清、血浆和细胞培养上清液样本中的天然和重组人TNFα蛋白。
交叉反应性 以1000 pg/mL的速度制备重组蛋白,并对其交叉反应性进行分析。 以下靶点未发现交叉反应:-人IL-2-人IL-4-人IL-1α-人IFN-γ-人TNF-β-人TNF R1。 干扰 以1000pg/mL制备重组人TNF R1,并测试其干扰。 未观察到对的干扰。 物种反应性 该试剂盒识别人TNFα蛋白。 其他物种的反应性通过测量不同物种的1000 pg/mL重组蛋白来确定,插入人类标准曲线中的蛋白质浓度,并将插入的浓度表示为在相同稀释度下测定的蛋白质浓度的百分比。 反应性物种:灵长类 以下物种的反应性<3%:小鼠/大鼠
校准 这种免疫测定是针对高度纯化的人TNF-α进行校准的。 NIBSC/WHO未分类纯化人TNFα制剂12/154在该试剂盒中进行了评估。 未分类标准TNFα的剂量反应曲线与SimpleStep标准曲线平行。 要将使用SimpleStep人类TNFα试剂盒获得的样本值转换为近似NIBSC 12/154国际单位,请使用以下等式。
NIBSC(12/154)近似值(IU/mL)=0.094 x单步人TNFα值(pg/mL)。 -
说明 TNF-α,也称为cachectin或TNFSF1A,是TNF超家族的原型配体,在炎症、凋亡、增殖、侵袭、血管生成、转移和形态发生中起着重要作用。 它以26kDa跨膜蛋白的形式在巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞和肿瘤细胞上表达。 TNF-α通过蛋白水解过程分裂为六条链:(1)TNF膜形式,(2)细胞内结构域1,(3)细胞内区域2,(4)C结构域1、(5)C结构区2和(6)TNF可溶性形式。TNF-阿尔法发出的信号因启动信号事件的配体类型(细胞内、膜或可溶性)而异。 例如,TNF-α的膜形式似乎介导抗肿瘤治疗反应,而可溶性配体与炎症和增殖有关。 -
平台 微孔板
性能
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存放说明 储存于+4°C。 请参阅协议。 -
组件 1 x 96测试 10 x 96测试 1 x 384测试 10X清洗缓冲液PT(ab206977) 1 x 20毫升 1 x 200毫升 1 x 20毫升 384孔CaptSure™微孔板 0 x 0单位 0 x 0单位 1台 抗体稀释液4BR 1 x 6毫升 10 x 6毫升 1 x 6毫升 人TNFa捕获抗体 1 x 600微升 10 x 600微升 1 x 600微升 人TNFa检测抗体 1 x 600微升 10 x 600微升 1 x 600微升 人TNFa冻干重组蛋白 2瓶 2 x 10小瓶 2瓶 平板密封件 1台 10台 1台 样品稀释剂NS(ab193972) 1 x 50毫升 2 x 250毫升 2 x 50毫升 SimpleStep预涂层96孔微孔板(ab206978) 1台 10台 0 x 0单位 停止解决方案 1 x 12毫升 1 x 120毫升 2 x 12毫升 TMB开发解决方案 1 x 12毫升 1 x 120毫升 2 x 12毫升 -
新冠肺炎疫苗 -
功能 与TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR结合的细胞因子。主要由巨噬细胞分泌,可诱导某些肿瘤细胞系的细胞死亡。 它是一种通过直接作用或刺激白细胞介素-1分泌而引起发热的强效热原,与恶病质的诱导有关。在某些条件下,它可以刺激细胞增殖和诱导细胞分化。 -
疾病相关 TNF的遗传变异是银屑病关节炎(PSORAS)易感性的一个原因[MIM:607507]。 PSORAS是一种与银屑病相关的炎症性、血清阴性关节炎。 这是一种异质性疾病,从轻微的非破坏性疾病到严重的进行性侵蚀性关节病。 银屑病关节炎有五种类型:以手指或脚趾小关节为主的不对称性少关节炎; 涉及四肢关节的不对称性关节炎; 对称性多发性关节炎,其特征是手、腕、踝和脚可能出现类风湿样改变; 多发性关节炎,这是一种罕见但变形和破坏性的疾病; 骶髂关节和脊柱关节炎(银屑病性脊柱炎)。 -
序列相似性 属于肿瘤坏死因子家族。 -
翻译后修饰 可溶性形式来源于通过蛋白水解过程形成的膜形式。 膜形式,而不是可溶性形式,在丝氨酸残基上磷酸化。 膜形式的去磷酸化通过与可溶性TNFRSF1A/TNFR1结合而发生。 O-糖基化; 聚糖包含半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰神经氨酸。 -
细胞定位 分泌膜和细胞膜。 -
UniProt提供的信息 -
别名 APC1接口 APC1蛋白 卡西汀
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替代版本 -
ELISA试剂盒 -
KO细胞系 -
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SimpleStep ELISA技术允许在一个步骤中形成抗体-抗原复合物,将检测时间缩短至90分钟。 将样品或标准品和抗体混合物一次性添加到微孔中,培养、清洗并添加最终基质。 有关详细的分步指南,请参阅协议。 -
96-well与384-well平板中的人TNF-α标准曲线示例。 绘制了背景数据值(平均值+/-SD)。 -
人TNF-α-SimpleStep ELISA试剂盒和主要竞争对手的传统ELISA试剂箱之间的标准曲线比较。 SimpleStep ELISA试剂盒显示灵敏度增加。 -
TNFα标准曲线的制备如第10节所述。 原始数据值如表所示。 绘制了背景数据值(平均值+/-SD)。 -
原始数据值显示在表中 -
在10F RPMI中用1.5%PHA-M处理PBMC细胞46小时。 根据TNF-α标准曲线插值并校正样品稀释度,重复测量TNF-β浓度。 未稀释的样品是PHA-M处理的PBMC细胞培养上清液10%。 绘制插值稀释因子校正值(平均值+/-SD,n=2)。 PHA-M处理的PBMC细胞培养上清液中的平均TNF-α浓度为7326.31 pg/mL。 -
在10F RPMI中用1.5%PHA-M或载体对照刺激PBMC细胞,并培养46小时。 重复测量TNF-α浓度,并根据TNF-阿尔法标准曲线进行插值。 未稀释样品为PHA-M刺激的PBMC细胞培养上清液10%和未刺激的PBMC-细胞培养上清10%。 绘制插值稀释因子校正值(平均值+/-SD,n=2)。 反算PHA-M刺激的PBMC细胞培养上清液中的平均TNF-α浓度为7265.71 pg/mL,而在未刺激的PBMC-对照中未检测到。 -
在生物样品中以2倍稀释系列测量天然TNF-α。 在样品稀释剂NS中进行样品稀释。 -
将重组TNF-α添加到生物样品中,并在样品稀释液NS中进行2倍稀释。 对20名健康人类女性/男性供体进行了重复测量,以确定TNFα的存在。 所有值均低于检测范围 NL–非线性 -
根据标准曲线插值人TNFα浓度。 细胞培养样本的上清液被连续稀释,并用人TNF-αELISA试剂盒(ab181421)进行评估。 野生型THP-1和TNFα基因敲除THP-1( 约273761 )对细胞进行重复评估(n=2)。 用100 ng/ml LPS处理细胞16 h以诱导TNF-α的表达,或不用LPS处理。 数据表示为平均值,误差条表示标准偏差。”
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (195)
Abdulfattah SY&Samawi FT公司 在伊拉克患者样本中,评估TNF-α基因单核苷酸多态性(rs1800629)-308G/A作为与心绞痛相关的遗传标志物的作用。 基因工程生物技术杂志 21:2 (2023). 公共医学:36622512 叶·T 等人。 LncRNA CCAT1在结核病患者中过度表达并预测其生存率。 免疫炎症疾病 10:218-224 (2022). 公共医学:34847295 张X和孙Y 染色质螺旋酶DNA结合蛋白1样(Forkhead box O3a的负调控因子)促进血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。 生物工程 13:2597-2609 (2022). 公共医学:35001835 李G 等人。 敲除长非编码RNA浆细胞瘤变异易位1通过调节动脉粥样硬化中的microRNA-30c-5p减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤。 生物工程 13:2791-2802 (2022). PubMed:35038974 叶Z 等人。 在类风湿性关节炎中,长非编码RNA癌症易感性候选物2通过微小RNA-18a-5p/B细胞易位基因3信号轴调节人类成纤维细胞样滑膜细胞的功能。 生物工程 13:3240-3250(2022)。 公共医学:35045800