主要功能和细节
检测类型:半定量 检测方法:比色法 平台:缩微板阅读器 分析时间:3小时30分钟 样品类型:核提取物 灵敏度:500 ng/孔
概述
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产品名称 -
检测方法 比色法 -
样品类型 核提取物 -
检测类型 半定量 -
灵敏度 500 ng/井 -
检测时间 3小时 3000万 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
产品概述 Oct4转录因子测定试剂盒(比色法)(ab207224)是一种高通量测定法,用于量化核提取物中Oct4的激活。 该分析结合了快速ELISA格式和敏感、特异的非放射性转录因子活化分析。
含有Oct4共识结合位点(5'–ATTTGA A ATGCAAAT–3')的特定双链DNA序列被固定在96 well板上。 核提取物中的活性Oct4与寡核苷酸特异结合。 Oct4由一种初级抗体检测,该抗体识别Oct4的一个表位,只有当该蛋白被激活并与目标DNA结合时才能访问该表位。 HRP结合二级抗体在OD 450 nm处提供灵敏的比色读数。 本产品于10月4日检测人类、小鼠和大鼠。
关键性能和优点:
检测时间:3.5小时(不包括细胞提取物制剂)。 检测限:<0.5µg核提取物/孔。 检测范围:0.5–5µg核提取物/孔。
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说明 Oct4(八聚体结合转录因子4)是POU家族的一部分,其成员包含由POU特异性(POUS)和POU同源域(POUHD)组成的二部分DNA-结合域。 通过柔性连接子连接这些亚结构域,使POU转录因子具有在DNA上采用多种结合构型的内在能力。 POU转录因子最初被鉴定为能够激活其启动子区域内含有八聚体序列的顺式作用元件的基因的蛋白质。 它们绑定到一致序列ATGCAAAT。 Oct4基因只在哺乳动物中发现。 在小鼠中,它位于17号染色体上,分为五个外显子,编码1.5 kb的mRNA转录物。 人类Oct4与小鼠Oct4的同源性为87%,位于6号染色体上。 人类通过选择性剪接产生两个转录本,而小鼠只产生一个转录本。 Oct4也在其他哺乳动物中发现,包括牛和鼠。 Oct4 mRNA和蛋白存在于未受精的卵母细胞中,并且在整个桑椹胚期的胚胎的所有细胞(32-64个细胞)中表达丰富且均匀。 第7.5天之后,10月4日严格限制在原始生殖细胞(PGC),即配子的前体。 Oct4也在胚胎干(ES)和胚胎癌(EC)细胞中表达。 哺乳动物胚胎发生分化的第一个形态学标志是早期胚泡阶段滋养层(TE)的形成。 虽然TE细胞仅限于胚外细胞系,但内细胞团(ICM)细胞仍保持全能性。 在这个阶段,形成TE的细胞中Oct4被下调,而ICM中的细胞保持高水平的Oct4。 因此,高水平的Oct4表达被认为可以使细胞保持全能状态,而下调与分化有关。 一些基因被发现含有Oct4结合位点; 一些是积极的,一些是消极的。 人绒毛膜促性腺激素(HGC)的α和β亚单位受到Oct4的负调控,而血小板衍生生长因子(PDGF)α则被Oct4激活。 -
平台 缩微板阅读器
性能
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存放说明 请参阅协议。 -
组件 1 x 96测试 5 x 96测试 10X抗体结合缓冲液 1 x 2.2毫升 1 x 11毫升 10X洗涤缓冲液 1 x 22毫升 1 x 110毫升 96-well分析板 1台 5台 抗抗体HRP-结合IgG 1 x 11微升 1 x 55微升 绑定缓冲区 1 x 10毫升 1 x 50毫升 开发解决方案 1 x 11毫升 1 x 55毫升 二硫苏糖醇(DTT)(1 M) 1 x 100微升 1 x 500微升 鲱鱼精子DNA 1 x 100微升 1 x 500微升 裂解缓冲液AM4 1 x 10毫升 1 x 50毫升 突变寡核苷酸 1 x 100微升 1 x 500微升 Oct-4抗体 1 x 11微升 1 x 55µl P19核提取物 1 x 40微升 1 x 200微升 封板机 1台 5台 蛋白酶抑制剂鸡尾酒 1 x 100微升 1 x 500微升 停止解决方案 1 x 11毫升 1 x 55毫升 野生型寡核苷酸 1 x 100微升 1 x 500微升 -
研究领域 -
功能 与八聚体基序(5'-ATTTGCAT-3')结合的转录因子。 与DNA上的SOX2形成三聚体复合体,并控制许多参与胚胎发育的基因的表达,如YES1、FGF4、UTF1和ZFP206。 对早期胚胎发生和胚胎干细胞多能性至关重要。 -
组织特异性 在发育中的大脑中表达。 在皮层、嗅球、海马体和小脑的特定细胞层中含量最高。 成人组织中表达水平低。 -
序列相似性 属于POU转录因子家族。 5类亚科。 包含1个同源盒DNA-结合域。 包含1个POU特定域。 -
发展阶段 在未分化胚胎干细胞中高表达,在类胚体(EB)形成后表达逐渐减少。 -
结构域 POU特异性结构域介导与PKM2的相互作用。 -
翻译后修饰 氨酰化提高蛋白质稳定性、DNA结合和反式激活活性。 增强YES1表达需要Sumoylation。 泛素化; 通过WWP2进行“Lys-63”连接的多泛素化,导致蛋白酶体降解。 -
细胞定位 核心。 以弥散和略带标点符号的模式表达。 -
UniProt提供的信息 -
别名 八聚体结合转录因子4 MGC22487型 10月3日
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数据库链接 Entrez基因: 5460 人类 Entrez基因: 18999 鼠标 Entrez基因: 294562 老鼠 Omim公司: 164177 人类 瑞士保护: Q01860问题 人类 瑞士保护: 第20263页 鼠标 尤尼金: 249184 人类 尤尼金: 632482 人类
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实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (1)
Bi Z(双Z) 等。 Nrf2和HIF1a融合到砷诱导的代谢重编程和癌症干细胞样细胞的形成。 治疗诊断科技 10:4134-4149 (2020). 公共医学:32226544