概述
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产品名称 -
亲本细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子4中1 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变转化生长因子介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合具有抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与作为负调控因子的14-3-3蛋白YWHAQ的分离,对其活性进行积极调节。 -
疾病相关 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
美国 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
结构域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接区是TGFβ介导的转录活性所必需的,并且与MH2结构域协同作用。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残留物磷酸化。 EGF和TGF-β治疗时Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1在Ser-418处的磷酸化促进配体依赖的泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 在TGF-β信号传导过程中,ADP-核糖基化负调控SMAD3转录反应。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏TGF-β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1防止其对TGF-β的核移位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息
产品
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KO细胞裂解物 -
相关产品
应用
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图片
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所有车道: 抗S-mad3抗体[EPR19686]-ChIP级( ab208182号 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: SMAD3敲除A549细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa细胞裂解物 车道4: SMAD3敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 48千Da 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab208182年 在55 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 ab208182号 在野生型HeLa细胞中显示与Smad3反应。 敲除细胞系ab255431(敲除细胞裂解物 约263834 )已使用。 野生型和Smad3基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab208182号 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第4外显子插入1 bp。
数据表及文件
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SDS下载 -
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