概述
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产品名称 人 RARA(视黄酸受体α)敲除HeLa细胞系 -
亲代细胞系 赫拉 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子7中1 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 冷冻保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 应每天对培养物进行监测。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 维甲酸受体。 视黄酸受体作为异二聚体与其靶反应元件结合,以响应其配体全反式或9-顺式视黄酸,并在各种生物过程中调节基因表达。 RXR/RAR异二聚体与由串联5'-AGGTCA-3'位点(称为DR1-DR5)组成的维甲酸响应元件(RARE)结合。 在没有配体的情况下,RXR-RAR异二聚体与包含转录辅抑制因子的多蛋白复合物相关,这些辅抑制因子可诱导组蛋白乙酰化、染色质缩合和转录抑制。 在配体结合中,辅抑制因子与受体分离,并与辅激活因子结合,导致转录激活。 在精子发生过程中,RARA在维甲酸诱导的生殖细胞发育的调节中起着重要作用。 在减数分裂前期开始时,对早期精母细胞的存活起作用。 在支持细胞中,可能促进早期减数分裂前期精母细胞的存活和发育。 与骨骼生长所需的RARG相一致,基质稳态和生长板功能(通过相似性)。 通过招募含有MLL5的染色质复合物,以配体依赖的方式调节靶基因的表达。 介导维甲酸诱导的粒细胞生成。 -
疾病相关 注:急性早幼粒细胞白血病中常见RARA染色体畸变。 与ZBTB16/PLZF易位t(11;17)(q32;q21); PML易位t(15;17)(q21;q21); NPM易位t(5;17)(q32;q11)。 PML-RARA癌蛋白需要PML环结构和线圈结构域来与UBE2I相互作用、核微颈定位和sumoylation。 此外,线圈域在阻止RA介导的转录激活和细胞分化中发挥作用。 -
序列相似性 属于核激素受体家族。 NR1亚家族。 包含1个核受体DNA结合域。 -
结构域 由三个结构域组成:一个调制N端结构域、一个DNA结合结构域和一个C端配体结合结构域。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残留物磷酸化。 磷酸化在细胞周期中没有变化。 Ser-77上的磷酸化对转录活性至关重要(根据相似性)。 AKT1的磷酸化对阻遏活性是必需的,但对DNA结合、蛋白质稳定性或亚细胞定位没有影响。 体外PKA磷酸化。 Ser-219和Ser-369的磷酸化对FSH信号的配体结合、核定位和转录活性至关重要。 SUMO2主要在Lys-399上进行酰化,这也是SENP6结合所需的。 在全反式维甲酸(ATRA)结合上,可能会发生对抗性变化,允许在两个额外的位点,即Lys-166和Lys-171上进行sumoylation。 可能由SENP6去甲酰化。 氨酰化水平决定核定位并调节ATRA介导的转录活性。 三甲基化增强了RXRA的异二聚作用,并积极调节转录激活。 无所不在。 -
细胞定位 核心。 细胞质。 核定位依赖于配体结合、磷酸化和琥珀酰化。 在没有配体的情况下,转运到细胞核依赖于PKC的激活和下游MAPK磷酸化。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物
应用
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图片
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所有车道: 抗视网膜酸受体α抗体[EPR23871-271]( 约275745 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: RARA CRISPR-Cas9编辑的HeLa细胞裂解物 3号车道: MCF7细胞裂解物 车道4: HepG2细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 51千Da 观察到的频带大小: 40千帕 为什么实际频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约275745 在40 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约275745 western blot显示与野生型HeLa细胞中的维甲酸受体α反应。 RARA敲除细胞系ab265176(RARA敲脱细胞裂解物 ab257629号 )低于40 kDa可能代表截断形式和劈开碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对野生型和RARA CRISPR/Cas9-HeLa编辑的细胞裂解液进行SDS-PAGE。 将膜封闭在3%的TBS-T牛奶中(0.1%吐温 ® )孵育前 约275745 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第7外显子插入1 bp。
数据表及文件
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