概述
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产品名称 人 MVP敲除HeLa细胞系 -
亲本细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第6外显子17 bp缺失,第6外显子1 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
试验 -
生物安全水平 2 -
规则说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,野生型细胞系不会自动包含在敲除细胞系订单中,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1添加推荐的野生型细胞系,无需额外费用。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞计数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶
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功能 正常拱顶结构所需。 Vaults是多亚基结构,可以作为参与信号转导的蛋白质的支架。 金库也可能在核质转运中发挥作用。 下调INFG介导的STAT1信号传导和JAK的随后激活。 通过MAP激酶下调SRC活性和信号传导。 -
组织特异性 存在于大多数正常组织中。 在具有分泌和排泄功能的上皮细胞以及长期接触外源性物质的细胞(如支气管细胞和肠壁细胞)中观察到较高的表达。 在许多多药耐药癌细胞中过度表达。 -
序列相似性 包含9个MVP(保险库)重复。 -
结构域 MVP 3介导与PTEN的相互作用。 MVP 4介导与PARP4的相互作用。 -
翻译后修饰 EGF刺激后对Tyr残基进行磷酸化。 通过PTPN11脱磷。 -
细胞定位 细胞质。 细胞核>核孔复合体。 5%发现于核孔复合体中。 EGF处理后从细胞核转移到细胞质。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-MVP抗体[EPR23594-106]( 约273093 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物,使用等体积0.1%TBS稀释的Intercept®(TBS)Blocking Buffer 车道2: MVP敲除HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物,使用等体积0.1%TBS稀释的Intercept®(TBS)Blocking Buffer 3号车道: Caco-2(人大肠腺癌上皮细胞)全细胞裂解物,使用等体积0.1%TBS稀释的Intercept®(TBS)Blocking Buffer 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 99千帕 观察到的频带大小: 110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约273093 在110 kDa下观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠单克隆[6C5]到GAPDH)在36 kDa时观察到。 约273093 Western blot显示抗MVP抗体[EPR23594-106]与野生型HeLa细胞中的MVP特异性反应。 MVP敲除细胞系ab264817(敲除细胞裂解物)的信号强度显著降低(与WT带相比强度降低8.7%) ab257544号 )已使用。 约273093 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )4点孵化? 隔夜,稀释度分别为1000分之一和20000分之一。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
所有车道: 抗-MVP抗体[EPR13226(B)]( 公元177145年 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa裂解物 车道2: MVP淘汰赛HeLa裂解物 3号车道: A549裂解液 车道4: MOLT-4裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 99千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab177145年 在99 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 公元177145年 抗-MVP抗体[EPR13226(B)]显示与野生型HeLa细胞中的MVP特异性反应。 当敲除细胞系ab264817(敲除细胞裂解物 ab257544号 )已使用。 对野生型和MVP敲除样品进行SDS-PAGE分析。 公元177145年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1000分之一和20000分之一的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-MVP抗体[EPR13227(B)]( 约175239 )稀释1/2000 车道1: 野生型HeLa裂解物 车道2: MVP淘汰HeLa裂解物 3号车道: A549裂解液 车道4: MOLT-4裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 99千帕 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约175239 在110 kDa下观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约175239 抗-MVP抗体[EPR13227(B)]显示与野生型HeLa细胞中的MVP特异性反应。 当敲除细胞系ab264817(敲除细胞裂解物 ab257544号 )已使用。 对野生型和MVP敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约175239 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以2000年1倍和20000倍稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第6外显子17 bp缺失。 -
等位基因2:第6外显子1 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载