概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第4外显子10 bp缺失,第4外显子1 bp缺失,以及第4外显子1 bp插入,第4外部显子26 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
规则说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约255450 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL表示建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 阿米洛宁X,Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8、11 D16S539:11、12 vWA:14个 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 介导干扰素刺激反应元件(ISRE)启动子激活。 作为抗病毒活性的分子开关。 病毒感染过程中产生的DsRNA导致C末端丝氨酸/苏氨酸簇上的IRF3磷酸化。 这诱导构象变化,导致其二聚化、核定位并与CREBBP结合蛋白(CREBBP)结合形成dsRNA-activated factor 1(DRAF1),这是一种在ISRE控制下激活基因转录的复合物。 该复合物分别与IFN-α和IFN-β启动子上的IE和PRDIII区域结合。 IRF-3没有任何转录激活域。 -
组织特异性 在多种组织中组成性表达。 -
序列相似性 属于IRF家族。 含有1个IRF色氨酸五肽重复DNA结合结构域。 -
翻译后修饰 在许多丝氨酸残基上构成磷酸化。 C末端丝氨酸/苏氨酸簇在IKBKE和TBK1诱导下被磷酸化。 Ser-385和Ser-386可能被特异性磷酸化以响应诱导。 另一种模型认为,396到405之间的五个丝氨酸/苏氨酸残基被磷酸化,以应对病毒感染。 牛痘病毒蛋白E3抑制IRF3的磷酸化和随后的活化。 泛素化的; 泛素化涉及RBCK1导致蛋白酶体降解。 多泛素化; 泛素化涉及TRIM21,导致蛋白酶体降解。 HERC5介导的ISG导致IRF3持续激活,并通过干扰PIN1结合抑制IRF3泛素化。 IRF3的磷酸化状态不会改变ISGylation。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 穿梭于细胞质和细胞核之间,出口是主要影响因素。 激活后,IRF3与CREBBP相互作用阻止其向细胞质输出。 -
UniProt提供的信息
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所有车道: 抗IRF3抗体[EP2419Y]( 约76409 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: IRF3敲除A549细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约76409 在50 kDa时观察到。 红色-加载控制 ab8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约76409 western blot显示在野生型HEK-293T细胞中与IRF3反应,在IRF3敲除细胞系ab267097(IRF3基因敲除细胞裂解物 约256953 ). 对野生型和IRF3敲除的HEK-293T细胞裂解物进行SDS-PAGE。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约76409 和 ab8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IRF3抗体[EPR2418Y]( ab68481年 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: IRF3敲除A549细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约68481 在50 kDa时观察到。 红色-加载控制 ab8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约68481 western blot显示与野生型A549细胞中的IRF3反应,在IRF3敲除细胞系ab267097(IRF3基因敲除细胞裂解物 约256953 ). 对野生型和IRF3敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab68481年 和 ab8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第4外显子26 bp缺失 -
等位基因2:第4外显子10 bp缺失。 -
等位基因3:第4外显子1 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载