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抗体的验证包括一系列功能性实验,例如免疫印迹、免疫组化和免疫荧光。当用于验证时,每种实验都有自身的优势和不足。知晓这一点对于研究者来说是重要的,有助于他们对于结果更有信心。
抗体验证实验:
在设计实验时需要考虑许多因素-有缺陷的实验设计可能导致抗体无法正常工作或完全失效。以下并非完备的列表,但覆盖实验设计中需要考虑的大部分关键点:
1选择和准备细胞系或组织样本-真正的阳性和阴性对照非常重要
显然,选择表达目标蛋白的样本和不表达的细胞系作为阴性对照非常重要。这种信息可以通过查看前期文献或使用在线蛋白数据库获得。值得注意的是,抗体可能识别或不识别在天然或变性状态的蛋白质。例如,在进行免疫印迹实验时,识别天然状态的抗体可能不能识别变性条件下的样本。
参考我们的工作分解结构或酶联免疫吸附试验样品准备指南。
2骤
骤、孵、很、4℃过夜,所以抗体的最佳孵育时间必须进行优化摸索。如果时间太短,可能检测灵敏度有限。同样,如果时间太长,可能会遇到背景染色的问题。其他因素-如样品稀释液,封闭液和使用变性或非变性条件-也同样需要分别被优化。
参考我们的 和。
三。选择缓冲液
大部分抗体实验会使用两种缓冲液:美国公共广播电视公司或待定更优的缓冲液可能需要被使用。另外,细微配方如酸碱度值也应该被认真考虑。
参考我们的优化工作分解结构结果和抗体储存的缓冲液建议。