主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EP796Y]到PAK2 适用于:IP、ICC/IF、WB、IHC-P、Flow Cyt(Intra) 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EP796Y]至PAK2 -
宿主 兔子 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 人PAK2 aa 1-100(N末端)内的合成肽。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: 问题13177 -
阳性对照 WB:HeLa、NIH/3T3、RAW 264.7、野生型HEK-293T、PAK2 CRISPR-Cas9编辑的HEK-293G和C6细胞裂解物。 IHC-P; 人乳腺癌组织 IF/ICC:T47D细胞系。 流式细胞仪(内部):HeLa细胞。 IP:HeLa和NIH/3T3细胞裂解物。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存温度为-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%牛血清白蛋白 -
正在加载浓度信息。。。 -
发动机 纯化蛋白A -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP796Y型 -
同种型 免疫球蛋白G -
新冠肺炎疫苗
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白
应用
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靶标
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功能 活化的激酶作用于多种靶点。 磷酸化核糖体蛋白S6、组蛋白H4和髓磷脂碱性蛋白。 全长PAK 2刺激细胞存活和细胞生长。 该过程至少部分由促凋亡BAD的磷酸化和抑制介导。Caspase-activated PAK-2p34参与细胞死亡反应,可能涉及JNK信号通路。 裂解的PAK-2p34似乎比CDC42激活形式具有更高的活性。 -
组织特异性 普遍表达。 骨骼肌、卵巢、胸腺和脾脏中含量较高。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 STE-Ser/Thr蛋白激酶家族。 STE20亚家族。 包含1个CRIB域。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
翻译后修饰 当被CDC42/p21激活时,全长PAK 2被自动磷酸化。 在裂解后,两种肽PAK-2p27和PAK-2p34都发生了高度的自磷酸化,PAK-2p27分别在丝氨酸和苏氨酸残基上磷酸化。 PAK-2p27的自磷酸化可以在没有任何效应物的情况下发生,并且依赖于Thr-402的磷酸化,因为PAK-2p27是一种外源性底物。 在凋亡过程中,caspase-3或caspase-3-like蛋白酶通过蛋白质水解裂解产生活性PAK-2p34。 泛素化,导致其蛋白酶体降解。 PAK-2p34为肉豆蔻酰化。 -
细胞定位 细胞质和细胞核。 细胞质>核周区。 膜。 与ARHGAP10的相互作用可能将PAK-2p34定位改变为胞质核周区。 肉豆蔻酰化改变PAK-2p34在膜上的位置。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 C-t-PAK2抗体 CB422抗体 酶代码EC2.7.11.1抗体
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图片
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所有车道: 1/5000稀释的抗PAK2抗体[EP796Y](ab76293) 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: PAK2 CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa ab255552 细胞裂解产物 车道4: PAK2淘汰赛HeLa 约260287 细胞裂解产物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 65千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗PAK2抗体[EP796Y]在1/5000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负载控制染色,以红色显示。在Western blot中,ab76293显示与PAK2特异结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中在65 kDa处观察到一条带,在PAK2 CRISPR-Cas9编辑的细胞系中未观察到该大小的信号 约282648 (CRISPR-Cas9编辑的细胞裂解物 ab283047号 ). 在CRISPR-Cas9编辑的低于65 kDa的裂解液通道中观察到的谱带可能代表PAK2的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析了野生型和PAK2 CRISPR-Cas9编辑的HEK-293T细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗PAK2抗体[EP796Y](ab76293) 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: PAK2敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 60千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在60kDa下观察到ab76293。 红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 在蛋白质印迹中显示ab76293与野生型HeLa细胞中的PAK2反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约264814 (敲除细胞裂解物 ab257573号 )已使用。 对野生型HeLa和PAK2敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜在室温下用3%脱脂奶粉在0.1%TBST中封闭1小时。 ab76293和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
用1:100稀释(2.02μg/ml)的纯化ab76293标记PAK2的人乳腺癌组织切片的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 热介导抗原检索使用 约93684 (Tris/EDTA缓冲液,pH 9.0)。 组织用苏木精复染。 免疫组织探针一步法HRP聚合物(即用型)二级抗体以1:0的稀释度使用。 以PBS代替一抗作为阴性对照。 -
用1:100稀释度(2.0μg/ml)的纯化ab76293标记PAK2的MCF7(人乳腺癌上皮细胞)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 细胞固定在4%的多聚甲醛中,并用0.1%的tritonX-100渗透。 用Ab195889抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor ® 594)1:200(2.5μg/ml)。 约150077 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488)作为二级抗体,稀释度为1:1000。 DAPI核复染。 用PBS代替一级抗体作为二级抗体对照。 -
用纯化的ab76293在1/20稀释度(10 ug/ml)(红色)下标记PAK2的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)细胞的细胞内流式细胞术分析。 细胞用4%多聚甲醛固定,用90%甲醇渗透。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488)二级抗体以1/2000稀释度使用。 同位素对照-兔单克隆IgG(黑色)。 未标记对照-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)。 -
车道1 :野生型HAP1细胞裂解物(20µg) 2号车道 :PAK2敲除HAP1细胞裂解物(20µg) 3号车道 :HeLa细胞裂解物(20µg) 4号车道 :人类淋巴结组织裂解物(20µg) 1-4车道 :合并信号(红色和绿色)。 绿色-在60 kDa下观察到ab76293。 红色-装载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 当使用PAK2敲除样品时,未纯化的ab76293显示与PAK2特异性反应。 对野生型和PAK2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab76293和 约8245 (GAPDH的负荷控制)分别稀释1/1000和1/10000,并在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1h。 -
所有车道: 1/5000稀释的抗-PAK2抗体[EP796Y](ab76293)(纯化) 车道1: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: NIH/3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)全细胞裂解物 3号车道: RAW 264.7(小鼠Abelson小鼠白血病病毒诱导的肿瘤巨噬细胞)全细胞裂解物 车道4: C6(大鼠神经胶质瘤神经胶质细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 抗狂犬病IgG(HRP),针对1/2000稀释度的非还原型IgG 预测的带宽大小: 58千Da 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
1/2000稀释(未净化)的抗PAK2抗体[EP796Y](ab76293)+10µg的HeLa细胞裂解液 次要 HRP标记山羊抗兔抗体(稀释度为1/2000) 预测的带宽大小: 58千Da 观察到的频带大小: 61千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? -
未经纯化的ab76293,以1/100稀释,用免疫组织化学方法对石蜡包埋的人类乳腺癌组织中的PAK2进行染色。 在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。 -
未纯化ab76293染色的T47D细胞的ICC/IF图像。 细胞被100%甲醇固定(5分钟),然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中培养1小时,以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 然后将细胞与抗体(ab76293,1µg/ml)在+4°C下孵育过夜。 二级抗体(绿色)为 约96899 ,DyLight®488山羊抗兔IgG(H+L),以1/250稀释度使用1h。 Alexa Fluor®594 WGA用于在1/200稀释度下标记质膜(红色)1小时。 采用DAPI对浓度为1.43µM的细胞核(蓝色)进行染色。 -
重叠直方图显示HeLa细胞用未纯化ab76293染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育细胞,以阻断非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab76293,1/100稀释)孵育30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150077 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(1µg/1x10 6 细胞)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。
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文献 (12)
田莉 等人。 长非编码RNA LINC01006通过充当microRNA-28-5p的分子海绵和增加PAK2的表达,在宫颈癌中显示出致癌特性。 国际分子医学杂志 47:不适用(2021年)。 公共医学:33576457 库日·埃洛瓦克 等人。 I组p21活化激酶在白血病细胞与纤维连接蛋白粘附中的作用。 细胞Adh Migr 15:18-36 (2021). 公共医学:33464167 曾J 等人。 Pak2减少导致小鼠早期胚胎发育失败。 生殖生物学内分泌学 19:181(2021)。 公共医学:34879863 陈B 等人。 miR-302e调控的CXCL1通过抑制JAK-STAT信号通路参与结直肠癌细胞活性和运动。 前Oncol 10:577229 (2020). 公共医学:34079750 格雷贝诺娃D 等人。 PAK1、PAK1? 15和PAK2:相似性、差异性和相互作用。 科学代表 9:17171 (2019). 公共医学:31748572