重组神经元核抗原抗体抗体[EPR12763]-神经元标记（ab177487）

免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析小鼠大脑组织标记NeuN的1/100稀释度（B），SOX1ab242125号在1/100稀释度（C）下使用ab109186稀释1/100（D）。以抗兔和小鼠的HRP为二级抗体，DAPI作核染色。用Tris-EDTA缓冲液（ph9.0，表位检索液2）进行热介导抗原回收20分钟。热介导抗原回收（徕卡ER2，PH9.0，20分钟）用于轮间酪酰胺信号放大，以去除前一轮的抗体，以避免任何交叉反应。 

A组：抗NeuN融合染色（绿色，蛋白石™520），抗SOX1（红色，蛋白石™570）和抗Olig2（黄色，蛋白石™690年）。

B组：anti NeuN代表神经元。

C组：神经祖细胞上的抗-SOX1染色。

D组：寡突胶质细胞抗Olig2染色。

切片在三轮染色中孵育：按照ab177487的顺序，ab242125号和ab109186室温下30分钟。每一轮之后是一个单独的荧光酪酰胺信号放大系统。

免疫染色是在Leica Biosystems BOND®RX仪器上用蛋白石进行的™ 四色套件。图像采集采用徕卡SP8共焦显微镜。

人小脑组织（福尔马林固定石蜡包埋切片）的荧光多重免疫组化分析。

Neu-N的合并染色（ab177487；黄色；蛋白石™570），抗βIII微管蛋白(阿布52623; 红色；蛋白石™690）和抗GFAP(ab68428; 绿色；蛋白石™520页）。

免疫染色是在莱卡生物系统键上进行的^®带蛋白石的RX仪器™ 配套元件。

切片用ab177487（1/1000稀释液）进行三轮染色培养，阿布52623（1/200稀释）和ab68428（1/250稀释度）；每个都使用单独的荧光酪酰胺信号放大系统。

柠檬酸钠抗原回收（ph6.0）用于轮间酪胺信号扩增，以去除前一轮的抗体，以避免任何交叉反应。

DAPI（蓝色）被用作核反染色剂。

用ab177487免疫荧光染色法对神经干细胞（人iPSC衍生的谷氨酸能神经元，ab259259号)诱导后1天分化。

用4%甲醛（10min）固定细胞，用0.1%PBS-Tween渗透5min，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h。然后在+4°C下用1μg/ml的ab177487培养细胞ab7291，小鼠单克隆[DM1A]至α-微管蛋白，稀释1/1000。然后用ab150081号，山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor®488）以1/1000稀释度预吸收（以绿色显示），以及ab150120型，山羊抗鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）以1/1000稀释度预吸收（红色显示）。细胞核DNA用DAPI标记（蓝色）。

用Perkin Elmer Operetta HCA获得图像，并显示共焦截面的最大强度投影。

用ab177487在1/100标记NeuN的小鼠原代神经元细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%曲通X-100渗透。山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor®488）(ab150077)以at1/1000作为次级抗体（green）。用抗MAP2小鼠单克隆抗体复染细胞(ab11267)稀释1/200，用山羊抗鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）可视化(ab150120型)稀释1/1000（红色）。用DAPI（蓝色）标记细胞核DNA。

共焦成像主要显示小鼠原代神经元细胞的核染色。共聚焦扫描Z步进设定为0.3μm，然后进行最大Z投影的图像处理。

小鼠小脑切片NeuN（绿色）和GFAP（红色）双重染色的IHC-P图像阿布4674（1/1500）。

切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。然后用稀释为1/5000的兔单克隆至NeuN（ab177487）和鸡多克隆GFAP孵育(阿布4674)稀释至1/1500。用ab150097号羊抗兔IgG与Alexa-Fluor结合^®488（1/500）和ab150176号羊抗鸡IgY与Alexa-Fluor结合^®594（1/500）

曝光时间-
1-2号车道：3分钟。
3-4车道：1分钟。

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

NeuN抗体ab177487与组织清除试剂盒一起使用阿布243298穿透、染色并清除小鼠大脑1毫米冠状断面。蓝色：大皮，绿色：NeuN。

了解更多组织清除试剂盒、试剂和协议旨在使厚组织切片更容易染色，并从每个有价值的组织切片中获取更多数据。

对于1毫米的脑切片，我们建议开始稀释1:200，也使用山羊抗兔IgG H&L Alexaflu488(ab150077)稀释1:400。

免疫细胞化学/免疫荧光分析从iPSCs标记NeuN（绿色）分化的人神经元，ab177487在0.1%TritonX-100，1%山羊血清，1X PBS中1/500，在4℃下16小时。细胞用多聚甲醛固定，用0.5%Triton X-100渗透。然后，在23℃下用5%血清阻断细胞20分钟。山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor®488）(ab150077)以1/1000作为次级抗体。用Tuj1抗体染色神经元树突和轴突（红色）。

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​市售NeuN克隆在IHC-P中的独立比较。

竞争对手A：领先的小鼠单克隆抗体。

竞争对手B：非Abcam兔单克隆抗体。

所有3个样本均用柠檬酸钠进行抗原回收。

ab177487产生特异性染色，相当于稀释一半的领先小鼠单克隆抗体。非Abcam小鼠单克隆抗体对不表达NeuN的Purkinje细胞的特异性较差。

抗兔IgG-VHH单域抗体NeuN（ab177487）的IHC图像(ab191866号)福尔马林固定石蜡包埋正常人小脑组织切片染色。

切片脱蜡，然后在Dako Pascal压力锅中使用柠檬酸钠缓冲液（pH6）进行热介导抗原回收预处理，使用标准工厂设置方案。然后在室温下使用含有0.025%（v/v）Triton X-100、0.3M（w/v）甘氨酸和3%（w/v）BSA的TBS中阻断非特异性的蛋白质-蛋白质相互作用。然后在+4°C下用兔抗NeuN单克隆抗体[EPR12763]在含有0.025%（v/v）Triton X-100和3%（w/v）BSA的TBS中孵育过夜。在室温下用1.6%（v/v）过氧化氢在含有0.025%（v/v）Triton X-100的TBS中淬火内源性过氧化物酶30分钟，激动。二级抗体，抗兔IgG VHH单域抗体（HRP）(ab191866号，1.0µg/ml），然后在室温下在含有0.025%（v/v）Triton X-100和3%（w/v）BSA的TBS中施加1小时，然后使用稳定的DAB/Plus在室温下显影10分钟(ab103723). 然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

阴性对照（仅二级抗体，无原发性抗体）无染色，显示二级抗体特异性。

对于其他IHC染色系统（自动和非自动），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、抗体浓度和培养时间。

重叠直方图显示U-87mg（人胶质母细胞瘤星形细胞瘤上皮细胞系）细胞ab177487染色（红线）。 

细胞用80%甲醇固定（5min），然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中，以阻断非特异性蛋白质相互作用，随后在22°C下用抗体（ab177487，1/100稀释度）培养30分钟。使用的次级抗体是Alexa Fluor^®488山羊抗兔IgG（H&L）(ab150081号)在1/2000稀释度下在22°C下30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）(ab172730，1微克/1x10⁶在相同条件下使用的电池。未标记样本（蓝线）也被用作对照。 

用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了大于5000个事件。 

亚历山福禄^®488个(ab190195号)还有Alexa Fluor^®647年(ab190565号)此克隆可使用共轭版本。 

人骨髓神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y（人骨髓神经母细胞瘤细胞系）的免疫细胞化学/免疫荧光分析，标记NeuN（绿色），ab177487，1/300。细胞用4%多聚甲醛固定。Alexa Fluor公司^®以488株羊抗兔IgG（1/200）为二级抗体。用DAPI（蓝色）复染。

​市售NeuN克隆在IHC-Fr（丙酮固定小鼠齿状回切片）中的独立比较。

竞争对手A：领先的小鼠单克隆抗体。

竞争对手B：非Abcam兔单克隆抗体。

ab177487产生强烈的，特异性染色和最小的背景，甚至在一半的稀释竞争抗体。

ab177487免疫组化法（IHC-Fr-冰冻切片）在小鼠游离漂浮的50微米腰椎组织切片中染色NeuN。组织用甲醛固定，用Triton X-100渗透，并用10%血清在25°C下封闭2小时。样品在4°C下与一级抗体（PBS+Triton中的1/500）培养16小时^®以594株驴抗兔IgG多克隆（1/700）为次级抗体。

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小鼠脑组织切片ab177487免疫组织化学染色NeuN（IHC-Fr-冰冻切片）。组织用甲醛固定，并用Triton X-100+0.4%马血清在20°C下封闭30分钟。样品在4°C下与一级抗体（封闭溶液中的1/500）培养16小时^®以594株驴抗兔IgG多克隆（1/200）为次级抗体。

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猫小脑切片FOX3/NeuN染色的IHC-P图像（1/1000）。

切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。在21℃下用1%牛血清白蛋白阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/1000，并在21℃下与切片一起孵育2小时。使用的次级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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应用ab177487（1/500）对狗小脑切片FOX3/NeuN染色的IHC-P图像。

切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。用1%BSA在21°C下阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/500，并在21°C下与切片一起孵育2小时。使用的次级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析人胶质瘤组织用ab177487标记1/3000。用pH9的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原回收。以预稀释的HRP聚合物结合抗兔IgG作为二级抗体。苏木精复染。

大鼠脑切片FOX3/NeuN染色的IHC-P图像（1/2000）。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。在21℃下用1%牛血清白蛋白阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/2000，并在21℃下与切片一起孵育2小时。使用的二级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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小鼠大脑（额叶皮质）FOX3/NeuN染色IHC-P图像（1/800）。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。用1%牛血清白蛋白在21°C下阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/800并与切片在21°C下孵育2小时。使用的二级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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斑马鱼脊髓切片FOX3/NeuN染色的IHC-P图像（1/500）。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。用1%BSA在21°C下阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/500，并在21°C下与切片一起孵育2小时。使用的次级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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应用ab177487对绒猴小脑切片FOX3/NeuN染色的IHC-P图像（1/2000）。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。在21℃下用1%牛血清白蛋白阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/2000，并在21℃下与切片一起孵育2小时。使用的二级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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应用ab177487（1/1000）对绵羊大脑（额叶皮质）进行FOX3/NeuN染色的IHC-P图像。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。在21℃下用1%牛血清白蛋白阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/1000，并在21℃下与切片一起孵育2小时。使用的次级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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山羊小脑切片FOX3/NeuN染色IHC-P图像（1/500）。切片去石蜡化，用柠檬酸进行热介导抗原回收。用1%BSA在21°C下阻断切片10分钟。将ab177487稀释1/500，并在21°C下与切片一起孵育2小时。使用的次级抗体是与生物素（1/250）结合的山羊多克隆抗体至兔IgG。

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