主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔SHP2单克隆抗体[Y478] 适用于:WB、IHC-P、IP、流式细胞周期(内部)、ICC/IF 敲除已验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [Y478]至SHP2 -
宿主 兔子 -
特异性 该抗体识别SHP2。 根据序列分析,预计该抗体可检测剪接亚型2。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 -
免疫原 人SHP2 aa 500-600(C末端)内的合成肽。 确切的顺序是专有的。 -
阳性对照 IHC-P:人类乳腺癌和子宫内膜组织。 WB:HEK-293T、Jurkat和THP-1细胞裂解物。 ICC/IF:Hek293和A431细胞。 流式细胞仪(内部):HAP1-WT和Jurkat细胞 IP:THP-1全细胞裂解物
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:40%甘油(甘油,甘油),59%PBS,0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 Y478年 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
共轭试剂盒 -
同位素控制 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
阳性对照
应用
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靶标
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功能 作用于各种受体和细胞质蛋白酪氨酸激酶的下游,参与从细胞表面到细胞核的信号转导。 -
组织特异性 广泛表达,在心脏、大脑和骨骼肌中含量最高。 -
疾病相关 PTPN11缺陷是LEOPARD综合征1型(LEOPARD1)的原因[MIM:15100]。 这是一种常染色体显性遗传病等位基因,伴有努南综合征。 首字母缩写LEOPARD代表慢精症、心电图传导异常、眼压过高、肺动脉狭窄、生殖器异常、生长迟缓和耳聋。 PTPN11缺陷是努南综合征1型(NS1)的原因[MIM:163950]。 努南综合征(NS)是一种以面部畸形、身材矮小、肥大、心脏异常、耳聋、运动迟缓和出血素质为特征的疾病。 一些Noonan综合征1型患者在颌骨或其他骨或软组织出现多个巨细胞病变,当发生在颌骨和关节时,这些病变被归类为色素沉着绒毛膜滑膜炎(PVNS)。 注:PTPN11突变占50%以上的病例。 NS很少与青少年粒单细胞白血病(JMML)相关。 NS1遗传为常染色体显性遗传。 PTPN11缺陷是青少年粒单核细胞白血病(JMML)的病因[MIM:607785]。 JMML是一种儿童骨髓增生异常综合征,约占儿童骨髓增生不良综合征(MDS)病例的30%和白血病病例的2%。 其特征是组织浸润的白细胞增多和髓系祖细胞对粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的体外超敏反应。 PTPN11的缺陷是异症综合征(MC)的一个原因[MIM:156250]。 这是一种骨骼疾病,伴有多发性外生骨疣和Ollier病的放射学胎儿,以多发性内生软骨瘤和骨软骨瘤样病变为特征。 -
序列相似性 属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族。 非受体2类亚家族。 包含2个SH2域。 包含1个酪氨酸蛋白磷酸酶结构域。 -
结构域 SH2结构域抑制磷酸酶活性。 这些结构域与含磷酸酪氨酸的蛋白质的结合可能通过诱导酶的构象变化来解除这种自抑制。 -
翻译后修饰 受体蛋白酪氨酸激酶激活时在Tyr-546和Tyr-584上磷酸化; 它为GRB2和其他含有SH2的蛋白质创造了一个结合位点。 -
细胞定位 细胞质。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 BPTP3抗体 CFC抗体 JMML抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗-SHP2抗体[Y478](ab32083) 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: PTPN11敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 68千Da 观察到的频带大小: 68千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在68 kDa下观察到ab32083。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab32083与野生型HEK-293T细胞中的SHP2反应。 敲除细胞系时观察到信号丢失 约266450 (敲除细胞裂解物 ab257618号 )已使用。 对野生型HEK-293T和PTPN11敲除的HEK-293 T细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab32083和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
用1:100稀释度(5.51µg/ml)纯化ab32083标记SHP2的人子宫内膜癌组织切片的免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)分析。 热介导抗原检索是使用 约93684 (Tris/EDTA缓冲液,pH 9.0)ImmunoHistoProbe一步法HRP聚合物(随时可用)用作二级抗体。 阴性对照:PBS代替初级抗体。 苏木精用作副染色剂 -
用纯化ab32083以1:50稀释度(11µg/ml)标记SHP2的A431(人表皮样癌上皮细胞)细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 细胞固定在4%的多聚甲醛中,并用0.1%的tritonX-100渗透。 用Ab195889抗α-管蛋白抗体[DM1A]-微管标记物(Alexa Fluor®594)1:200(2.5µg/ml)对细胞进行复染。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor®488, 约150077 )以1:1000(2µg/ml)稀释度作为二级抗体。 DAPI核复染。 用PBS代替一级抗体作为二级抗体对照。 -
Jurkat(人T细胞白血病T淋巴细胞)细胞的细胞内流式细胞术分析,用纯化的ab32083在1/50稀释(10µg/ml)下标记SHP2(红色)。 用4%的聚甲醛固定细胞。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488)二级抗体以1/2000稀释度使用。 同位素对照-兔单克隆IgG(黑色)。 未标记对照-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)。 -
车道1: 野生型HAP1细胞裂解物(20µg) 车道2: SHP2敲除HAP1细胞裂解物(20µg) 3号车道: A431细胞裂解物(20µg) 车道4: Jurkat细胞裂解物(20µg) 1至4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在68 kDa下观察到ab32083。 红色-装载控制, 约8245 ,在37 kDa下观察到。 当使用SHP2敲除样品时,未纯化的ab32083表现出与SHP2特异性反应。 对野生型和SHP2基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 ab32083和 约8245 (GAPDH的负荷控制)分别稀释1/1000和1/10000,并在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1h。 -
0.3µg/ml(纯化)的抗-SHP2抗体[Y478](ab32083)+15µg的THP-1(人单核细胞白血病单核细胞)全细胞裂解物 次要 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 68千Da 封闭和稀释缓冲液:5%NFDM/TBST -
重叠直方图显示用ab32083染色的HAP1野生型(绿线)和HAP1-PTPN11敲除细胞(红线)。 用4%甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清中培养细胞,以阻止非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(未纯化的ab32083,0.1µg/ml)培养30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)预吸收( 约150081 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 一种兔IgG同型控制抗体( 约172730 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用(HAP1野生型-黑线,HAP1-PTPN11敲除-灰线)。 未标记的样品也被用作对照(为了简单起见,没有显示这条线)。 使用50mW蓝色激光器(488nm)和530/30带通滤波器收集了>5000个事件的采集。 该抗体也可用于在相同条件下用80%甲醇(5分钟)固定并用0.1%PBS Triton X-100透化15分钟的HAP1细胞中。 -
用1/50未纯化ab32083对石蜡包埋人乳腺癌SHP2表达进行免疫组织化学分析。 -
未纯化的ab32083染色Hek293细胞。 将细胞在-20°C下100%甲醇固定5分钟,然后在室温下在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸的0.1%PBS吐温中孵育1小时,以使细胞透化并阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用。 然后在+4°C下将细胞与抗体(1/100稀释度下的ab32083)孵育过夜。 二级抗体(伪绿色)为山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体( 约150081 )在室温下以1/1000的稀释度使用1小时。 Alexa Fluor®594 WGA用于在室温下以1/200稀释1小时标记质膜(伪红色)。 DAPI用于在室温下以1.43µM的浓度对细胞核(伪蓝色)染色1小时。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (12)
李B 等。 在急性肺损伤中,SHP2的敲除通过下调ACSL4的表达来减轻LPS诱导的铁下垂。 过敏原免疫病理学(Madr) 51:143-152 (2023). 工作分解结构 , 国际商会/国际单项体育联合会 . 公共医学:37169572 Zhi J公司 等。 靶向SHP2使分化型甲状腺癌对MEK抑制剂敏感。 美国癌症研究杂志 12:247-264 (2022). 公共医学:35141016 杨H 等。 吉西他滨加铂一线化疗治疗的非小细胞肺癌患者中酪氨酸磷酸酶SHP2和ankyrin Hook1基因表达的临床病理学和预后意义。 Ann Palliat医学 9:2943-2952(2020)。 公共医学:32819122 唐Y 等。 EBV转化淋巴母细胞差异表达基因的生物信息学分析和关键基因的鉴定。 生物药剂师 116:108984 (2019). 公共医学:31129512 姚D 等。 CD47与PD-1致癌信号通路的上调有关。 国际临床实验病理学杂志 11:5612-5621 (2018). 公共医学:31949648