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使用敲除细胞株进行验证

抗Ki67抗体(ab15580)

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评论(218)问答(13)参考文献(2858)

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免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
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  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
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  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)

主要功能和细节

  • 兔多克隆至Ki67
  • 适用范围:IHC-P、ICC
  • 敲出验证
  • 反应:老鼠,人
  • 同型:IgG

选择批间可重复性更高的重组抗体

产品形象
抗Ki67抗体[SP6](ab16667)
  • 研究可靠 —— 各批次间结果一致且可重复
  • 长期批量供应 —— 采用重组技术,可实现快速生产
  • 首次实验即可成功 —— 经过大量验证确认了特异性
  • 符合伦理标准 —— 产品不含动物成分

概述

  • 产品名称

    抗Ki67抗体
    参阅全部 基67一抗
  • 描述

    兔多克隆抗体去Ki67
  • 宿主

    兔子
  • 经测试应用

    适用于:IHC-P公司,国际商会更多详细信息
  • 种属反应性

    与反应:老鼠,人类
    预测可用于:鼠,羊,兔,马,牛,狗,猪,猴,中国仓鼠,普通狨猴,叙利亚仓鼠
  • 免疫原

    合成肽。这些信息是Abcam和/或其供应商的专有信息。
    (肽可作为ab15581)

  • 常规说明

    Ab15580在ICC/IHC中进行了批量测试。这种抗体可以使IHC-Fr的性能发生变化,但我们可以保证IHC-P的一致性。一些客户已经成功地在Western Blot中使用了ab15580。更大分子量的蛋白质如Ki67可能更难在白细胞中检测到。我们建议几个潜在的优化步骤:加载更多的蛋白质(20µg及以上),使用较低百分比的凝胶和/或三醋酸三酯凝胶,增加抗氧化剂以保持蛋白质的减少,减少转移缓冲液中的甲醇和增加SDS,以及增加转移时间和电压。较大的蛋白质比较小的蛋白质更容易被降解,因此可能存在较低分子量的条带。如需更多信息或支持,请联系我们的科学支持团队。

    生命科学产业多年来一直处于可复制性危机中。Abcam在解决这一问题上处于领先地位,我们的一系列重组单克隆抗体和敲除编辑的细胞株用于金标准验证。请在购买前检查该产品是否满足您的需求。

    如果您有任何问题、特殊要求或顾虑,请在购买前向我们发送询价和/或联系我们的支持团队。本产品的推荐替代品可在下面找到,以及出版物、客户评论和问答

性能

  • 形式

    液体
  • 存放说明

    在4°C下装运。在+4°C下短期储存(1-2周)。交货时等分。储存在-20°C或-80°C。避免冻融循环。
  • 存储溶液

    pH值:7.40
    防腐剂:0.02%叠氮化钠
    成分:PBS

    浓度<1mg/ml的该产品批次可添加BSA作为稳定剂。如果您需要有关特定批次配方的信息,请联系我们的科学支持团队,他们会很乐意为您提供帮助。
  • 浓度信息加载。。。
  • 纯度

    免疫原亲和力纯化
  • 克隆

    多克隆
  • 同种型

    免疫球蛋白
  • 研究领域

    • 细胞生物学
    • 细胞周期
    • 标记
    • 神经科学
    • 细胞类型标记
    • 神经元标记
    • 体节标记
    • 标记和单元格标记
    • 细胞类型标记
    • 复制
    • 神经科学
    • 神经学过程
    • 神经发生
    • 癌症
    • 细胞周期
    • 细胞分裂
    • 癌症
    • 肿瘤生物标志物
    • 其他
    • 神经科学
    • 发展

相关产品

  • 接合试剂盒

    • PE/R-藻红蛋白结合试剂盒-Lightning Link®(ab102918)
    • APC接合套件-Lightning Link®(ab201807号)
  • 免疫肽(阻断)

    • Ki67肽(ab15581)
  • 同型控制

    • 兔IgG,多克隆-同型对照(芯片级)(ab171870)
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    • 内源性CB1/TRPV1激动剂NADA(N-花生四烯酸多巴胺)(ab120099号)
    • 固定和渗透/细胞固定和渗透试剂盒(流式细胞仪)(阿布185917)
    • 抗PCNA抗体(阿布29)
    • 抗BrdU抗体[BU1/75(ICR1)]-增殖标志物(阿布6326)

应用

保证书

承诺™承诺保证使用ab15580型于以下的经测试应用

“应用说明”部分 下显示的仅为推荐的起始稀释度;实际最佳的稀释度/浓度应由使用者检定。

应用 Ab型评论 说明
IHC-P公司 (六十五)
使用0.1-5µg/ml的浓度。在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。
国际商会 (六十九)
使用0.5-1µg/ml的浓度。

如果在4%PFA(20分钟,室温)中固定电池,建议使用0.1%Triton-X渗透电池5分钟。

阳性对照:HeLa和HAP1细胞

说明
IHC-P公司
使用0.1-5µg/ml的浓度。在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。
国际商会
使用0.5-1µg/ml的浓度。

如果在4%PFA(20分钟,室温)中固定电池,建议使用0.1%Triton-X渗透电池5分钟。

阳性对照:HeLa和HAP1细胞

靶标

  • 功能

    需要在核膜解体后保持单个有丝分裂染色体分散在细胞质中(PubMed:27362226)。与有丝分裂染色体的表面,染色体周层有关,并覆盖了染色体表面的大部分(PubMed:27362226)。通过形成空间和静电电荷屏障,防止染色体塌陷成单个染色质团:蛋白质具有高净电荷,充当表面活性剂,分散染色体并实现独立的染色体运动(PubMed:27362226)。结合DNA,偏爱超螺旋DNA和AT丰富的DNA(PubMed:10878551)。不影响有丝分裂染色体的内部结构(通过相似性)。可能在染色质组织中起作用(PubMed:24867636)。然而,目前尚不清楚它是在染色质组织中起直接作用,还是它在维持有丝分裂染色体分散方面的间接作用。
  • 序列相似性

    包含1个FHA域。
    包含16个K167R重复。
    包含1个PP1绑定域。
  • 发展阶段

    表达优先出现在细胞周期的G1、S、G2和M期,而G0期的细胞则无法检测到抗原(在蛋白质水平上)(PubMed:6206131)。在G2期和有丝分裂期间(蛋白质水平)出现最高水平。在间期,在核仁周围的纤维蛋白缺乏区形成纤维样结构(PubMed:2674163,PubMed:8799815)。
  • 翻译后修饰

    磷酸化。有丝分裂中磷酸化过度(PubMed:10502411,PubMed:10653604)。高磷酸化形式不结合DNA。
  • 细胞定位

    染色体。核心。核,核仁。与有丝分裂染色体的表面,染色体周层有关,并覆盖有丝分裂染色体表面的大部分(PubMed:27362226)。与G1期卫星DNA相关(PubMed:9510506)。在间期与染色质紧密结合,当染色质与浓缩染色体表面结合时,染色质结合减少(PubMed:15896774,PubMed:22002106)。主要定位于核周区的G1期,在后期,也可在整个核内部发现,主要局限于核基质(PubMed:22002106)。
  • 以上目标信息来源:UniProt加入P46013页UniProt财团
    2010年全球蛋白质资源(UniProt)
    核酸研究38:D142-D148(2010).

    UniProt提供的信息
  • 数据库链接

    • Entrez基因:4288人类
    • Entrez基因:17345老鼠
    • Entrez基因:246042老鼠
    • 奥米姆:176741人类
    • 瑞士保护:P46013页人类
    • 瑞士保护:E9PVX6型老鼠
    • 瑞士保护:问题61769老鼠
    • 单基因:689823人类
    • 单基因:80976人类
    • 单基因:4078老鼠
    查看所有内容
  • 别名

    • 单克隆抗体ki67抗体鉴定抗原
    • 单克隆抗体Ki-67抗体鉴定抗原
    • 抗原KI-67抗体
    • 抗原KI67抗体
    • 抗原Ki67抗体
    • 人源抗体
    • KIA抗体
    • 增殖标志物Ki-67抗体
    • mib1抗体
    • MIB抗体
    • MKI67抗体
    • PPP1R105抗体
    • 增殖标志蛋白Ki-67抗体
    • 增殖相关Ki-67抗原抗体
    • 蛋白磷酸酶1调节亚单位105抗体
    • RP11-380J17.2抗体
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  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)

    Mef1细胞ab15580染色Ki67。细胞用100%甲醇固定(5min),用0.1%PBS-tritonx-100渗透5min,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中阻断1h。然后在4°C下用0.5µg/ml的ab15580将细胞培养过夜ab7291,小鼠单克隆[DM1A]与α-微管蛋白负荷对照。然后用ab150081号山羊抗兔IgG-H&L多克隆次级抗体(Alexa Fluor®488),在1/1000稀释度下预吸附(以绿色显示)和ab150120型山羊抗小鼠IgG-H&L多克隆次级抗体(Alexa Fluor®594),在1/1000稀释度下预吸附(以伪红色显示)。细胞核DNA用DAPI标记(蓝色)。

    也适用于4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。

    图像是用高含量分析仪(Operetta CLS,Perkin Elmer)获得的,并显示了单个共焦截面。

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)

    HeLa细胞ab15580染色Ki67。细胞用100%甲醇固定(5min),用0.1%PBS-tritonx-100渗透5min,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中阻断1h。然后在4°C下用0.5µg/ml的ab15580将细胞培养过夜ab7291,小鼠单克隆[DM1A]与α-微管蛋白负荷对照。然后用ab150081号山羊抗兔IgG-H&L多克隆次级抗体(Alexa Fluor®488),在1/1000稀释度下预吸附(以绿色显示)和ab150120型山羊抗小鼠IgG-H&L多克隆次级抗体(Alexa Fluor®594),在1/1000稀释度下预吸附(以伪红色显示)。细胞核DNA用DAPI标记(蓝色)。

    也适用于4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。

    用高含量分析仪(Operetta CLS,Perkin Elmer)获得图像,并显示共焦截面的最大强度投影。

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)

    小鼠脾脏ab15580染色的IHC图像福尔马林固定石蜡包埋组织切片,在莱卡胶上进行TM公司系统采用标准方案B。用柠檬酸钠缓冲液(pH6)进行热介导抗原回收预处理20分钟。然后在室温下用5µg/ml的ab15580培养15分钟。用山羊抗兔生物素化二级抗体检测原发性,并用HRP结合ABC系统进行可视化。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)这张照片是由加布里埃尔·卢纳先生提供的

    多聚甲醛固定兔细胞(视网膜)标记Ki67(绿色),使用1/200稀释度的ab15580,然后在ICC分析中使用驴抗兔Alexa Fluor®568二级抗体。以正常驴血清为阻断剂,在4℃下作用15小时

    组织浸泡在4%多聚甲醛中,在4摄氏度下过夜。然后将组织包埋在10%琼脂糖中,在100微米处切片。在开始免疫细胞化学之前,切片置于2N盐酸中1小时。Ki-67(分裂细胞为红色)。

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)

    人脾Ki67染色的IHC图像福尔马林固定石蜡包埋组织切片,在Leica键上进行TM公司系统采用标准方案F。用柠檬酸钠缓冲液(pH6)进行热介导抗原回收预处理20分钟。然后在室温下用1µg/ml的ab15580培养15分钟,并使用HRP共轭紧密聚合物系统进行检测。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

    对于其他IHC染色系统(自动和非自动),客户应优化可变参数,如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体培养时间。

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)

    ab15580在野生型HAP1细胞(上图)和Ki67基因敲除的HAP1细胞(下图)中染色Ki67。细胞用100%甲醇固定(5min),用0.1%Triton X-100渗透5min,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1h。然后用浓度为1μg/ml的ab15580对细胞进行培养ab195889号在1/250稀释度下(以伪红色显示)在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG Alexa Fluor®488(ab150081号)浓度为2μg/ml(以绿色显示)。用DAPI标记细胞核DNA。

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)图片由Xiang H.等人提供。Cell Discov。2017年;3: 17019年。doi:10.1038/细胞盘。2017.19根据Creative Commons许可证复制http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/。

    在稳态、24和48天采集小鼠气管上皮共聚焦图像 h之后2受伤。组织切片用UHRF1和增殖标记物Ki67共染色。 

    用ab15580在1:1的稀释度下染色Ki67 000

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)

    NADA(N-花生四烯酸多巴胺)处理的SK-N-SH细胞ab15580染色Ki67(ab120099号),由国际商会。如文献所述,Ki67表达减少与NADA(N-花生四烯酸多巴胺)浓度增加相关。
    细胞在37°C下在含有不同浓度的培养基中培养10分钟ab120099号在乙醇中,室温下用4%甲醛固定10分钟,室温下用含10%山羊血清、0.3 M甘氨酸、1%BSA和0.1%吐温的PBS封闭2小时。在含有1%BSA和0.1%吐温的PBS中,在4℃下用ab15580(1µg/ml)对处理过的细胞进行染色。A山羊抗兔DyLight 488二级抗体(ab96899号)以1/250稀释度作为次级抗体。细胞核用DAPI复染,呈蓝色。

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)图片由法国巴黎ESPCI神经生物学实验室Julien Laffaire提供

    荧光共聚焦显微镜(20x)观察小鼠嗅球,肾小球外层,显示Ki67免疫反应性(ab15580;1/1000;RT过夜,0.25%TX-100无阻滞步骤),使用次级山羊抗兔荧光抗体(Alexa fluro 488;RT时1/300 2h)。

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)这张图片是由一个匿名的Abreview提供的
    ab15580用IHC-P(甲醛固定石蜡包埋切片)染色Ki67增殖标记物。组织标本用甲醛固定,在25℃下用10%山羊血清封闭30分钟,在靶提取液中通过热调解进行抗原回收。样本在25°C下用一级抗体1/5000(TBST)孵育1小时

    见Abreview

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)这张图片是由一个匿名的Abreview提供的
    ab15580用免疫组织化学法(IHC-P-多聚甲醛固定石蜡包埋切片)染色Ki67-增殖标记物。组织用多聚甲醛固定,4%血清25℃封闭30分钟;抗原回收是在柠檬酸缓冲液(pH6.0)中通过热介导的。将样品与一级抗体(5µg/ml封闭缓冲液中)在4°C下培养16小时。使用德州红山羊抗兔IgG多克隆(1/100)作为次级抗体。

    见Abreview

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)这张图片由不列颠哥伦比亚大学柯克·麦克马纳斯提供

    SK-N-SH细胞生长到融合状态,然后血清饥饿48小时,主要进入G0。然后,将多聚甲醛固定,并以1/1000的稀释度用抗Ki67(ab15580)进行免疫荧光标记。大多数细胞几乎没有或几乎没有Ki67染色,表明它们处于G0停滞期(红细胞)。两个细胞显示强烈的核仁Ki67染色,表明它们仍在循环(绿色细胞)。DNA用DAPI染色并显示为红色。Ki67染色显示为绿色。x 63倍放大。

    在HeLa细胞的异步群体中也可以看到类似的结果。Ki67染色定位于核仁周围和增殖细胞的整个核浆。(此数据未显示,但可根据要求提供)。

  • 免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫细胞化学-抗Ki67抗体(ab15580)这张图片是由Jose Javier Martin De Llano博士提交的一份摘要

    ab15580at1/50染色人脐动脉内皮细胞。用多聚甲醛固定并封闭组织,然后用皂甙渗透,用抗体孵育16h。以FITC结合的山羊抗兔IgG作为次级抗体。合并后的图像显示了指数细胞总数中表达Ki67的细胞。

    见Abreview

  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    ab15580染色人皮肤癌FFPE切片的IHC图像。切片用压力锅热介导的抗原回收与柠檬酸钠缓冲液(pH6)在125°C下预处理30秒。切片与ab15580在1:200稀释度下在室温下培养1h,并使用HRP共轭聚合物系统进行检测。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。
  • 免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)
    免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡切片)-抗Ki67抗体(ab15580)这张图片是由Jim Manavis提交的一份简讯

    甲醛固定石蜡包埋小鼠肿瘤组织切片1/2000标记ab15580的免疫组化分析。次级抗体为1/250稀释的生物素结合山羊多克隆载体。 

    见Abreview

实验方案

  • 免疫组织化学方案
  • 免疫细胞化学和免疫荧光协议

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数据表及文件

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文献(2858个)

发表研究结果有使用ab15580型?请让我们知道,以便我们可以引用本数据表中的参考文章。

ab15580型被引用在 2858文献中.

  • 杨Y等等。 维生素C通过抑制Notch3在长期培养过程中抑制牙周膜干细胞的衰老。 J细胞生理学236:1237-1251(2021年)。公共医疗:32662081
  • 范思思等等。 哺乳动物INDY在小鼠中的神经系统缺失模拟饮食限制诱导的记忆增强。 生物科学与医学科学杂志76:50-56(2021年)。公共医疗:32808644
  • A和A等等。 消除NF-?波形蛋白+基质细胞中的B信号减弱Barrett食管模型的肿瘤发生。 癌变42:405-413(2021年)。公共医疗:33068426
  • 于S等等。 circRNA-circ-MYBL2是一种新的肿瘤抑制因子和多发性骨髓瘤潜在的生物标志物。 休姆电池34:219-228(2021年)。公共医疗:33058028
  • 张Q等等。 MicroRNA-221通过直接靶向FBXW11和调控Wnt信号,促进骨肉瘤细胞增殖和抑制凋亡。 医学研究院52:191-199(2021年)。公共医疗:33131925
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免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)检测抗Ki67抗体的研究进展

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免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)
样品
小鼠组织切片(肿瘤)
抗原回收步骤
热介导
渗透作用
不
规范
肿瘤
挡步
血清阻断1小时0分钟浓度10%温度25°C
固定剂
甲醛
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提交于 2022年5月26日

抗Ki67抗体的免疫组织化学(冰冻切片)回顾

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应用
免疫组织化学(冰冻切片)
样品
小鼠组织切片(骨骼肌)
渗透作用
是-TritonX(0.1%)
规范
骨骼肌
挡步
BSA作阻断剂1小时0分钟浓度:3%·温度:25°C
固定剂
没有人
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提交于 2022年5月24日

免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)检测抗Ki67抗体的研究进展

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应用
免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)
样品
人体组织切片(U87MG细胞)
抗原回收步骤
热介导-使用的缓冲液/酶:Tris/EDTA
渗透作用
是-过氧化氢
规范
U87MG细胞
固定剂
甲醛
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提交于 2022年4月22日

抗Ki67抗体的免疫细胞化学研究进展

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应用
免疫细胞化学
样品
人培养细胞(MDA-MB-231细胞)
渗透作用
是-0.1%Triton-X100,PBS 10'
规范
MDA-MB-231细胞
挡步
Bloxall作堵剂20分钟·浓度:100%·温度:20°C
固定剂
甲醛
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提交于 2022年4月7日

抗Ki67抗体的免疫印迹分析

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免疫印迹
样品
人细胞裂解物-全细胞(U937细胞)
凝胶运行条件
还原变性(4-20%三甘氨酸凝胶)
装载量
40微克
规范
U937电池
挡步
牛奶作阻滞剂1小时0分钟浓度:5%温度:20°C
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提交于 2022年2月25日

抗Ki67抗体的免疫细胞化学/免疫荧光分析

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免疫细胞化学/免疫荧光
样品
人细胞(SKCO-15上皮细胞)
渗透作用
是-0.5%Triton X-100 10分钟
规范
SKCO-15上皮细胞
挡步
2%驴血清,PBS+中0.05%吐温-20作阻断剂30分钟·浓度:2%·温度:20℃
固定剂
多聚甲醛
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提交于 2021年12月4日

抗Ki67抗体的免疫细胞化学/免疫荧光分析

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免疫细胞化学/免疫荧光
样品
人细胞(胶质母细胞瘤细胞系)
渗透作用
是-Triton X
规范
胶质母细胞瘤细胞系
挡步
血清阻断剂30分钟·浓度:3%·温度:20℃
固定剂
丙酮
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西蒙娜·格拉德夫人

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提交于 2021年10月27日

抗Ki67抗体的免疫细胞化学/免疫荧光分析

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免疫细胞化学/免疫荧光
样品
小鼠细胞(原始264.7细胞)
渗透作用
是-Triton-x 0.5%(PBS)
规范
原始264.7单元格
挡步
血清阻断1小时0分钟浓度10%温度25°C
固定剂
甲醛
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提交于 2021年10月21日

免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)检测抗Ki67抗体的研究进展

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免疫组织化学(福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片)
样品
人体组织切片(脑)
抗原回收步骤
热介导-使用的缓冲液/酶:柠檬酸盐
渗透作用
是-Triton-X 100
规范
大脑
挡步
BSA作阻断剂1小时0分钟浓度:3%·温度:21°C
固定剂
甲醛
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西蒙娜·格拉德夫人

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提交于 2021年8月20日

抗Ki67抗体的免疫细胞化学/免疫荧光分析

很好
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免疫细胞化学/免疫荧光
样品
小鼠细胞(小鼠皮层培养)
渗透作用
是-0.2%TritonX-100,在PBS中放置3小时,并使用封闭溶液。
规范
小鼠皮层培养
挡步
血清阻断3小时0分钟浓度10%温度28°C
固定剂
多聚甲醛
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列宁·韦拉瓦尔先生

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提交于 2021年8月17日

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