(美国)
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产品名称 -
亲代细胞系 HCT116型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子4中1 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型HCT116细胞系( ab255451型 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: McCoY5a+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 科隆 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:10、11 D13S317:10,12天 D7S820:11、12 D16S539:11、13 vWA:17、22 TH01:8、9 TPOX:8、9 CSF1PO:7、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 微管蛋白是微管的主要成分。 它结合两摩尔GTP,一个位于β链上的可交换位点,另一个位于α链上的不可改变位点。 TUBB3在正确的轴突引导和维持中起着关键作用。 -
组织特异性 表达主要局限于中枢和外周神经系统。 -
疾病相关 TUB3缺陷是先天性3A型眼外肌纤维化(CFEOM3A)的原因[MIM:60638]。 一种先天性眼球运动障碍,表现为限制性眼肌麻痹,影响由动眼神经和/或滑车神经支配的眼外肌。 它的临床特征是向下凝视时眼睛固定、上睑下垂和头部后倾。 先天性眼外肌3型纤维化是一种非进行性、常染色体显性遗传病,其表现多种多样。 患者可能是双侧或单侧受累,他们的眼球运动缺陷包括完全性眼肌麻痹(眼睛固定在低斜视和外斜视位置),以及轻度无症状的眼球运动受限。 眼睑下垂、屈光不正、弱视和代偿性头部位置与更严重的疾病相关。 在某些情况下,眼部表型伴有其他特征,包括发育迟缓、胼胝体发育不全、基底神经节畸形、面部无力、多发性神经病。 -
序列相似性 属于微管蛋白家族。 -
结构域 高酸性的C末端区域可以结合阳离子,例如钙。 -
翻译后修饰 C末端的一些谷氨酸残基是多谷氨酸化的。 这种修饰只发生在谷氨酸残基上,并导致γ-羧基上的聚谷氨酸链。 由于人体中缺少功能性TTLL10,因此也会发生单甘醇化,但不会发生多甘醇化。 单糖基化主要局限于纳入轴突(纤毛和鞭毛)的微管蛋白,而谷氨酰化则普遍存在于神经元细胞、中心粒、轴突和有丝分裂纺锤体中。 这两种修饰可以共存于相邻残基上的同一蛋白质上,降低糖基化水平会增加聚谷氨酰胺化,并相互促进。 这种修饰的确切功能尚不清楚,但它们调节轴突微管的组装和动力学。 -
细胞定位 细胞质>细胞骨架。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗β-Ⅲ型管蛋白抗体[EP1569Y]-神经标记物( ab52623型 )稀释1/1000 车道1: 野生型HCT116细胞裂解物 车道2: TUBB3敲除HCT116细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 50千Da 观察到的频带大小: 52千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab52623型 在52 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab52623型 western blot显示与野生型HCT116细胞中的β-III Tubulin发生反应。 敲除细胞系ab266900(敲除细胞裂解物 ab257070型 )已使用。 对野生型HCT116和TUBB3敲除HCT116细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab52623型 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗β-Ⅲ型管蛋白抗体[EPR19591]( ab215037号 )稀释1/2000 车道1: 野生型HCT116细胞裂解物 车道2: TUBB3敲除HCT116细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 50千Da 观察到的频带大小: 52千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab215037号 在52 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab215037号 western blot显示与野生型HCT116细胞中的β-III Tubulin发生反应。 敲除细胞系ab266900(敲除细胞裂解物 ab257070型 )已使用。 对野生型HCT116和TUBB3敲除HCT116细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab215037号 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1:2000和1:20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第4外显子插入1 bp
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载