概述
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产品名称 -
产品概述 Western blot数据表明,CRISPR基因编辑可能导致相关蛋白的截短。 请参阅数据图像。 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 通过CRISPR/Cas9实现敲除; X=1 bp缺失; 帧移位=100% -
通道编号 <20 -
淘汰验证 下一代测序(NGS) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
说明 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经测试应用
性能
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存放说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab280507-人SMAD3敲除A549细胞裂解物 1 x 100微克 ab259782-人类野生型A549细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性
靶标
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功能 受体调节型SMAD(R-SMAD)是一种由TGF-β(转化生长因子)和激活素1型受体激酶激活的细胞内信号转导和转录调节剂。 结合TGF-β调节的许多基因启动子区域中的TRE元件,并在形成SMAD3/SMAD4复合物时激活转录。 也可以在AP-1/SMAD位点形成SMAD3/SMAD4/JUN/FOS复合物来调节TGF-β介导的转录。 可能通过调节原代角质形成细胞的生长和迁移以及改变TGF介导的单核细胞趋化性,对伤口愈合产生抑制作用。 这种对伤口愈合的影响似乎对激素敏感。 软骨生成和骨生成的调节器,并抑制骨折的早期愈合。 通过刺激PDPK1激酶与作为负调控因子的14-3-3蛋白YWHAQ的分离,对其活性进行积极调节。 -
疾病相关 大肠癌 Loeys-Dietz综合征3 -
序列相似性 属于矮人/SMAD家族。 包含1个MH1(MAD同源1)域。 包含1个MH2(MAD同源2)域。 -
结构域 MH1结构域是DNA结合所必需的。 还结合DNA结合所必需的锌离子。 MH2结构域是同源和异源相互作用以及转录调控所必需的。 足够用于核进口。 连接子区域是TGFβ介导的转录活性所必需的,并与MH2结构域协同作用。 -
翻译后修饰 丝氨酸和苏氨酸残留物磷酸化。 EGF和TGF-β治疗中Thr-179、Ser-204和Ser-208连接区的磷酸化增强。 Ser-208是MAPK介导的磷酸化的主要位点。 CDK介导的磷酸化以细胞周期依赖的方式发生,并抑制SMAD3的转录活性和抗增殖功能。 这种磷酸化被黄哌啶醇抑制。 G(1)/S结合处的最大磷酸化。 还通过TGFBR1和ACVR1磷酸化C末端SXS基序中的丝氨酸残基。 TGFBR1介导的这些C末端位点的磷酸化是与SMAD4相互作用、核定位和反式激活活性所必需的,并且似乎是TGF-β介导的连接区磷酸化的先决条件。 PPM1A在C末端SXS基序中去磷酸化。 这种去磷酸化破坏了与SMAD4的相互作用,促进核输出并终止TGF-β介导的信号传导。 CSNK1G2/CK1在Ser-418处的磷酸化促进配体依赖的泛素化和随后的蛋白酶体降解,从而抑制SMAD3介导的TGF-β反应。 PDPK1磷酸化。 MH2结构域中EP300在细胞核中的乙酰化作用正向调节其转录活性,并通过TGF-β增强。 无所不在。 单泛素化,防止DNA结合。 USP15脱泛素可减轻TGF-β靶基因的抑制并促进其活化。 PARP1和PARP2使Poly-ADP-核糖化。 ADP核糖基化在TGF-β信号传导过程中负调控SMAD3转录反应。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 缺乏TGF-β的细胞质和细胞核。 在TGF-β刺激下,与SMAD4复合后迁移至细胞核(PubMed:15799969)。 通过磷酸酶PPM1A的作用,从SMAD2/SMAD4复合物中释放,并通过与RANBP1的相互作用从细胞核中输出(PubMed:16751101,PubMed:19289081)。 在细胞核内膜与LEMD3共定标(PubMed:15601644)。 MAPK介导的磷酸化似乎对核导入没有影响(PubMed:19218245)。 PDPK1阻止其对TGF-β的核转位(PubMed:17327236)。 -
UniProt提供的信息 -
别名 DKFZP586N0721号 DKFZp686J10186号 hMAD 3号机组
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KO细胞系 -
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应用
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图片
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车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道2: SMAD3敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约84177 在50 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。
ab84177型 显示与Smad3特异性结合。 在野生型细胞裂解物中观察到50kDa的条带,而在Smad3敲除细胞系中没有这种大小的信号 约263915 (敲除细胞裂解物ab264513)。 对野生型和SMAD3敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约84177 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])分别在4°C、1μg/ml和1:20000稀释液中过夜。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道2: SMAD3敲除物A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 3号车道: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道4: 人肾细胞裂解物20 ug 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab208182号 在50 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。
ab208182号 显示为与Smad3特异结合。 在野生型细胞裂解液中在50 kDa处观察到一条带,而在Smad3敲除细胞系中没有此大小的信号 约263915 (敲除细胞裂解物ab264513)。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab208182号 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道2: SMAD3敲除物A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物20 ug 3号车道: HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物20 ug 车道4: 人肾细胞裂解物20 ug 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约40854 在48 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。
约40854 显示为与Smad3特异结合。 在野生型细胞裂解液中在50 kDa处观察到一条带,而在Smad3敲除细胞系中没有此大小的信号 约263915 (敲除细胞裂解物ab264513)。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约40854 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释度分别为1/1000和1/2000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
通过CRISPR/Cas9实现敲除; X=1 bp缺失; 帧移位=100%
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
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