概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第4外显子16 bp缺失,第4外显子17 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 第16天第539页:第9页,第13页 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 非受体蛋白酪氨酸激酶参与细胞运动、增殖和凋亡的信号通路。 通过酪氨酸磷酸化激活,以响应细胞粘附或抗体交联诱导的整合素聚集,或通过配体如蛙皮素或溶血磷脂酸的G蛋白偶联受体(GPCR)占据,或通过LDL受体占据。 微管诱导的Tyr-397去磷酸化对诱导局灶性黏附分解至关重要。 在致癌转化中发挥潜在作用,导致激酶活性增加。 -
组织特异性 在所有测试的器官、淋巴细胞系中都有表达,但在大脑中表达最为丰富。 -
序列相似性 属于蛋白激酶超家族。 酪氨酸蛋白激酶家族。 FAK亚家族。 包含1个FERM域。 包含1个蛋白激酶结构域。 -
结构域 第一个Pro-rich结构域与CRK-associated衬底(BCAR1)和CASL的SH3结构域相互作用。 羧基末端区域是焦点粘附靶向序列(FAT)的位点,它介导FAK1定位于焦点粘附。 -
翻译后修饰 活化后在6个酪氨酸残基上磷酸化。 PTPN11可以催化微管诱导的Tyr-397脱磷酸化反应,ZFYVE21可以对其进行调节。 当EPHA2被其配体EFNA1激活时,PTPN11将其去磷酸化。 -
细胞定位 细胞连接>局灶性粘连。 细胞膜。 局部粘连的成分。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-FAK抗体[EP1831Y]( 约76496 )稀释1/500 车道1: HeLa细胞裂解物 车道2: A431细胞裂解物 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: PTK2敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 119千Da 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约76496 在119 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37kDa下观察到。 约76496 在野生型HEK-293T细胞中显示与FAK反应。 敲除细胞系ab255421(敲除细胞裂解物 邮编:263766 )已使用。 对野生型和FAK基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约76496 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C、1/500稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-FAK抗体[EP695Y]( ab40794年 )稀释度为1/1000 车道1: HeLa细胞裂解物 车道2: A431细胞裂解物 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: PTK2敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 119千帕 其他波段位于: 37 kDa(可能的负载控制) 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约40794 在119 kDa时观察到。 红色-装载控制, 约8245 在37kDa下观察到。 约40794 在野生型HEK-293T细胞中显示与FAK反应。 敲除细胞系ab255421(敲除细胞裂解物 约263766 )已使用。 对野生型和FAK基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约40794 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第4外显子17 bp缺失 -
等位基因2:第4外显子16 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载