概述
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产品名称 个人 OTUB1敲除HEK-293T细胞系 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子1中19 bp缺失和外显子1中插入选择盒 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表最低推荐稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 第7天第820天:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
中国 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 水解酶可以从蛋白质中去除结合泛素,并通过防止降解在蛋白质周转水平上发挥重要调节作用。 T细胞无能调节器,这是一种当T细胞对抗原再激发无反应且不再对其同源抗原反应时发生的现象。 通过与RNF128/GRAIL的相互作用发挥作用,RNF128-GRAIL是CD4 T细胞无能的关键诱导因子。异构体1破坏RNF128的稳定性,从而防止无能。相反,亚型2稳定RNF128并促进无能。令人惊讶的是,它调节RNF128介导的泛素化,但不去氘化多泛素化RNF128。 去泛素化雌激素受体α(ESR1)。 介导“Lys-48”连接的多泛素链的去泛素化,而不是“Lys-63”连接的多泛素链。 不能裂解双-双奎宁。 也能够从NEDD8缀合物中去除NEDD8,但与“Lys-48”连接的泛素相比,具有更低的偏好。 -
美国 Isoform 1普遍存在。 同工酶2仅在扁桃体、淋巴结和脾脏等淋巴组织以及外周血单个核细胞中表达。 -
序列相似性 属于肽酶C65家族。 包含1个OTU域。 -
结构域 除了在Cys-91活性位点上的泛素结合外,在Cys-23活性位点上还存在一个近端泛素结合位点,需要活性位点的占据才能与第二个位点紧密结合。 泛素的不同结合位点可以区分多泛素底物中不同的异肽连接(即“Lys-48”、“Lys-63”连接的多泛素),并实现连接特异性去泛素化。 -
细胞定位 细胞质。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-OTUB1抗体[EPR24917-75]( 约270959 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T(人胚胎肾上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: OTUB1敲除HEK293T(ab266551)全细胞裂解物 3号车道: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 31千Da 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 1-3号车道:合并信号灯(红色和绿色)。 绿色- 约270959 在31kDa时观察到。 红色-装载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约270959 在野生型HEK293T细胞中,抗-OTUB1抗体[EPR24917-75]与OTUB1特异性反应。 敲除细胞系ab266551(敲除细胞裂解物 约257569 )被使用。 对野生型和OTUB1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约270959 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透OTUB1 KO HEK293T(ab266551)细胞的免疫荧光分析 约270959 以1/250(2.204微克/毫升)稀释,然后 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体,稀释度为1/1000 2 ug/ml(绿色)。 共聚焦图像显示OTUB1 KO HEK293T细胞系无染色,亲本HEK293 T细胞核和细胞质染色。 观察到。 约195889年 使用抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa-Fluro®594)在1/200 2.5ug/ml稀释液(红色)下对微管蛋白进行反染色。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000 2 ug/ml稀释度预吸附。 -
所有车道: 抗-OTUB1抗体[EPR13028(B)]( 约175200 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: OTUB1敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 31千Da 观察到的频带大小: 31千Da 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约175200 在31 kDa时观察到。 红色-装载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约175200 在野生型HEK-293T细胞中,抗-OTUB1抗体[EPR13028(B)]与OTUB1特异性反应。 敲除细胞系ab266551(敲除细胞裂解物 约257569 )被使用。 对野生型和OTUB1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约175200 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1000倍和20000倍稀释度在4°CC下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-OTUB1抗体( 约101471 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: OTUB1敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 31千Da 观察到的频带大小: 130千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约101471 在130 kDa时观察到。 红色-装载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约101471 在野生型HEK-293T细胞中,抗OTUB1抗体与OTUB1特异性反应。 敲除细胞系ab266551(敲除细胞裂解物 约257569 )被使用。 对野生型和OTUB1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约101471 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C、1 in 10000 ug/ml和1 in 20000稀释液中培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:外显子1中19 bp缺失 -
等位基因2:选择盒插入外显子1。 -
OTUB1敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HEK293 T细胞的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
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