(美国)
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产品名称 -
亲代细胞系 赫拉 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子1插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 α亚单位具有细胞粘附性。 既可以作为粘附蛋白,也可以作为抗粘附蛋白。 可以在上皮细胞上提供一层保护层,防止细菌和酶的攻击。 β亚单位包含一个C末端结构域,通过磷酸化和蛋白质相互作用参与细胞信号传递。 调节ERK、SRC和NF-kappa-B通路中的信号传导。 在活化的T细胞中,直接或间接影响Ras/MAPK途径。 促进肿瘤进展。 调节TP53介导的转录并决定基因毒性应激反应中的细胞命运。 与KLF4结合TP53的PE21启动子元件并抑制TP53活性。 -
组织特异性 表达于上皮细胞的顶面,尤其是气道、乳腺和子宫的顶面。 也在激活和未激活的T细胞中表达。 在上皮性肿瘤(如乳腺癌或卵巢癌)和非上皮性肿瘤细胞中过度表达。 异构体Y仅在肿瘤细胞中表达。 -
疾病相关 MUC1/CA 15-3被用作乳腺癌的血清学临床标志物,以监测对乳腺癌治疗和疾病复发的反应(PubMed:20816948)。 随着时间的推移,水平降低可能表明治疗有积极的反应。 相反,水平升高可能表明疾病进展。 在早期疾病中,只有21%的患者表现出较高的MUC1/CA 15-3水平,这就是为什么CA 15-3不是一种有用的筛查测试。 大多数抗体以20个氨基酸的高度免疫优势核心肽结构域(APDTRPAPGSTAPPAHGVTS)串联重复序列为靶点。 一些抗体识别糖化表位。 髓质囊性肾病1 -
序列相似性 包含1个SEA域。 -
发展阶段 在胎儿发育过程中,从妊娠13周起结肠上皮中低水平表达。 -
翻译后修饰 高度糖基化(N-和O-连接的碳水化合物和唾液酸)。 每个串联重复序列中丝氨酸和苏氨酸残基的O-糖基化程度不同,从单糖基化到五糖基化不等。 平均密度从母乳中的约50%到T47D乳腺癌细胞中的90%以上不等。 回收过程中会发生进一步的唾液酸化。 来自肾癌和乳腺癌细胞的膜脱落糖蛋白具有优先唾液酸化的核心1结构,而来自相同组织的分泌型糖蛋白主要显示核心2结构。 这两种组织中的O-糖基化含量重叠,以末端岩藻糖和半乳糖、2-和3-键半乳糖,3-和3,6-键GalNAc-ol和4-键GlcNAc为主。 3,4-连锁GlcNAc在乳腺癌中的不同O-糖基化。 N-糖基化由分泌型MUC1/SEC的高甘露糖、酸性复合型和杂交聚糖以及跨膜型中性复合型MUC1/TM组成。 SEA结构域中的蛋白质水解通过自溶机制发生在内质网中,需要全长的SEA结构区以及P+1位点的Ser、Thr或Cys残基。 该位点的裂解也发生在亚型MUC1/X上,但不发生在亚型MUC1/Y上。外胚乳脱落由ADAM17介导。 CQC基序中半胱氨酸残基的双棕榈酰化是从内胚体再循环回质膜所必需的。 在C末端的酪氨酸和丝氨酸残基上磷酸化。 C末端酪氨酸的磷酸化增加MUC1和β-连环蛋白的核位置。 PKCδ磷酸化诱导MUC1与β-连环蛋白/CTNNB1结合,从而减少β-连环素/E-钙粘蛋白复合物的形成。 Src介导的磷酸化抑制与GSK3B的相互作用。 Src-和EGFR介导的Tyr-129磷酸化增加了与β-连环蛋白/CTNNB1的结合。 GSK3B介导的Ser-1227磷酸化降低了这种相互作用,但恢复了β-钙粘蛋白/E-钙粘蛋白复合物的形成。 通过LCK磷酸化T细胞受体激活。 PDGFR介导的磷酸化增加MUC1CT和CTNNB1的核共定位。 已显示N端序列从位置24或28开始。 -
细胞定位 保密; 细胞膜。 细胞质。 核心。 在EGF和PDGFRB刺激下,通过与CTNNB1的相互作用转运到细胞核,该过程受磷酸化刺激。 在HRG刺激下,在细胞核和顶端细胞膜上与JUP/gamma-catenin共定位。 仅位于高度极化上皮细胞质膜的顶端区域。 内吞作用后,内化并再循环至细胞膜。 位于微绒毛和长丝状突起尖端。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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所有车道: 抗MUC1抗体[EP1024Y]( ab45167型 )稀释1/1000 车道1: MCF7(人乳腺癌细胞系)细胞裂解物 车道2: T-47D(人乳腺导管上皮肿瘤细胞系)细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa(子宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞裂解物 车道4: MUC1敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 122千帕 观察到的频带大小: 24千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab45167型 在24 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab45167型 western blot显示与野生型HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)细胞中的MUC1反应。 敲除细胞系ab255412(敲除细胞裂解物 约263764 )已使用。 对野生型HeLa(来自宫颈腺癌的人上皮细胞系)和MUC1敲除的HeLa(来自宫颈腺癌的人上皮细胞系)细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab45167型 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子1插入1 bp。
数据表及文件
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