概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子1中2 bp缺失,外显基因1中2 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255448 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 层压板是核膜的组成部分,是内核膜核质侧的纤维层,被认为为核膜提供框架,也可能与染色质相互作用。 -
疾病相关 LMNB1的缺陷是白质营养不良脱髓鞘常染色体显性成年发病(ADLD)的原因[MIM:169500]。 ADLD是一种缓慢进行性和致命性脱髓鞘性脑白质营养不良,出现于生命的第四或第五个十年。 临床特征为早期自主神经异常、锥体和小脑功能障碍以及中枢神经系统对称性脱髓鞘。 它与多发性硬化和其他脱髓鞘疾病的不同之处在于,神经病理学显示,在存在次全脱髓鞘和星形胶质细胞缺乏的情况下,少突胶质细胞得以保存。 -
美国 属于中间丝族。 -
翻译后修饰 B型胺经历一系列修饰,如法尼基化和磷酸化。 层粘连蛋白磷酸化增加发生在包膜解体之前,可能在调节层粘连中起作用。 -
细胞定位 细胞核内膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗-Lamin B1抗体[EPR22165-121]( ab229025号 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: LMNB1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 66千Da 观察到的波段大小: 66-70千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab229025号 在66-70 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab229025号 western blot显示与野生型HeLa细胞中的LMNB1反应。 敲除细胞系ab255404(敲除细胞裂解物 约263825 )已使用。 对野生型HeLa和LMNB1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab229025年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-Lamin B1抗体[EPR8985(B)]-核膜标记( 约133741 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: LMNB1敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 66千帕 观察到的波段大小: 66至70 kDa 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约133741 在66-70 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约133741 western blot显示与野生型HeLa细胞中的LMNB1反应。 敲除细胞系ab255404(敲除细胞裂解物 约263825 )已使用。 对野生型HeLa和LMNB1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约133741 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第1外显子2 bp缺失。 -
等位基因2:在外显子1中插入2 bp。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载