概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子1中4 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( ab255928年 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 组蛋白去甲基酶,将组蛋白H3的“Lys-4”(H3K4me)和“Lys-9”(H3G9me)去甲基化,从而根据上下文充当辅活化剂或辅抑制剂。 通过FAD氧化底物,生成相应的亚胺,随后被水解。 通过介导表观遗传转录激活的特异标记H3K4me的去甲基化,发挥共抑制因子的作用。 去甲基化单(H3K4me1)和二甲基化(H3K4me2)H3K4me。 可能在抑制神经元基因中起作用。 仅此一种,它不能使核小体上的H3K4me去甲基化,并且需要RCOR1/CoREST的存在才能实现这种活性。 还作为雄激素受体(ANDR)依赖性转录的辅激活子,通过招募到ANDR靶基因并介导表观遗传转录抑制的特异标记H3K9me的去甲基化。 PRKCB存在于含ANDR的复合物中,该复合物介导组蛋白H3(H3T6ph)的“Thr-6”磷酸化,这是一种阻止H3K4me去甲基化的特异标记,可阻止KDM1A的H3K4me去甲基酶活性。 去甲基化p53/TP53的二甲基化“Lys-370”,阻止p53/TP33与TP53BP1的相互作用,并抑制p53/TP43介导的转录激活。 脱甲基并稳定DNA甲基化酶DNMT1。 胚胎发生期间原肠胚形成所必需的。 -
组织特异性 普遍表达。 -
序列相似性 属于黄素单胺氧化酶家族。 包含1个SWIRM域。 -
结构域 SWIRM域可以作为组蛋白尾部的锚定位点。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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抗KDM1/LSD1抗体[1B2F2]( 约69535 )+KDM1敲除HeLa细胞裂解液,20µg 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 92千帕 观察到的频带大小: 110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约69535 在110 kDa下观察到。 红色-抗GAPDH抗体[EPR16891]-负载控制( 约181602 )在37 kDa时观察到。 约69535 western blot显示与野生型HeLa细胞中的KDM1/LSD1反应。 敲除细胞系ab265790(敲除细胞裂解物 约256965 )已使用。 对野生型HeLa和KDM1敲除的HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约69535 和抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负荷控制( 约181602 )分别以1µg/ml和1:20000的稀释度在4°C下过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( 约216772 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗KDM1/LSD1抗体[EPR6825]-核标记和ChIP等级( 公元129195年 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: KDM1A敲除HeLa细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 92千帕 观察到的频带大小: 110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 公元129195年 在110 kDa下观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 公元129195年 western blot显示与野生型HeLa细胞中的KDM1/LSD1反应。 敲除细胞系ab265790(敲除细胞裂解物 约256965 )已使用。 对野生型HeLa和KDM1敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 公元129195年 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子1中4 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载