概述
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产品名称 人 IL1RN(IL1受体 拮() 敲除A-431细胞系 -
亲代细胞系 A431型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:第5外显子49 bp缺失。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
规则说明 建议控制: 人野生型A-431细胞系( 约275462 ). 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: McCoY5a+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供能够在复活时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 皮肤 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 表皮样癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚
靶标
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相关性 白细胞介素1受体拮抗剂抑制白细胞介素1α和β的活性,并调节多种与白细胞介素1相关的免疫和炎症反应。 该基因和其他五个相关细胞因子基因在2号染色体上形成一个约400 kb的簇。 该基因的多态性与患骨质疏松症和胃癌的风险增加有关。 已经报道了四种编码不同异构体的选择性剪接转录物变体。
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ELISA试剂盒 -
KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗IL-1RA抗体[EPR6483]( ab124962年 )稀释1/50000 车道1: 野生型A431细胞裂解物 车道2: IL1RN敲除A431细胞裂解物 3号车道: MOLT-4细胞裂解物 车道4: 人肾脏细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 18千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:1/50000稀释的抗IL-1RA抗体[EPR6483]染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab124962年 显示与IL-1RA特异结合。 在野生型A431细胞裂解液中18 kDa处观察到一条带,在IL1RN敲除细胞系ab273379(敲除细胞裂解液 约275530 ). 为了生成此图像,分析了野生型和IL1RN敲除A431细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
第5外显子49 bp缺失 -
所有车道: 抗IL-1RA抗体[EPR6483]( ab124962年 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型A431细胞裂解物 车道2: IL-1RA敲除A431细胞裂解物 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 19千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:稀释1/10000的抗IL-1RA抗体[EPR6483]染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab124962年 显示与IL-1RA特异结合。 在野生型A431细胞裂解液中19 kDa处观察到一条带,在IL1RN敲除细胞系ab273379(敲除细胞裂解液 约275530 ). 为了生成此图像,分析了野生型和IL1RN敲除A431细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
在野生型A431细胞(顶部面板)和IL1RN敲除的A431细胞中观察到IL-1RA染色(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后用10μg/ml浓度的抗IL-1ra抗体培养细胞(以绿色显示) 约195889年 (小鼠单克隆抗αTubulin-Alexa Fluor ® 594)以1/250稀释度(以红色显示)在4°C下过夜。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 0.5µg/ml的抗IL-1ra抗体 车道1: 野生型A431细胞裂解物 车道2: IL-1RA敲除A431细胞裂解物 3号车道: HeLa细胞裂解物 车道4: SK-OV-3细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 18千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 18 kDa时观察到绿色-抗IL-1ra抗体。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 Western blot显示,在野生型A431细胞中,抗IL-1ra抗体与IL-1ra反应,在IL-1ra敲除细胞系ab273379(IL-1ra基因敲除细胞裂解物)中观察到信号丢失 约275530 ). 对野生型A431和IL-1RA敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在与抗IL-1ra抗体和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])分别在4°C、0.5µg/ml和1:20000稀释液中过夜。 印迹与驴抗羊IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 约216775 )以及驴抗鼠680RD二级抗体,在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
根据IL-1RA标准曲线对人IL-1RA浓度进行插值。 用人IL-1ra ELISA试剂盒对细胞培养样品的上清液进行连续稀释和评估( ab211650型 ). 对野生型A-431、IL1RN敲除A-431(ab273379)和THP-1细胞进行重复评估(n=2)。 数据表示为平均值,误差条表示标准偏差。
数据表及文件
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SDS下载 -
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