概述
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产品名称 个人 HMGB1敲除HeLa细胞 裂解物 -
产品概述 Western blot数据表明,CRISPR基因编辑可能导致相关蛋白的截短。 请参阅数据图像。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9,外显子2中1 bp缺失实现敲除。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
说明 裂解液制备: 我们的裂解产物是使用RIPA缓冲液制成的,我们在其中添加了蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾液(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。请参阅我们的裂解协议,了解我们裂解产物的制备方法的更多详细信息。 用户存储说明: 冻干液可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
经测试应用
性能
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存放说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
年 1套 ab255499-人HMGB1敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255929-人类野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 第16天第539页:第9页,第10页 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
靶标
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功能 多功能氧化还原敏感蛋白,在不同的细胞隔室中具有不同的作用。 细胞核中是主要的染色质相关非组蛋白之一,作为DNA伴侣参与复制、转录、染色质重塑、V(D)J重组、DNA修复和基因组稳定性。 建议成为一种通用的核酸生物传感器。 促进宿主对无菌和感染信号的炎症反应,并参与先天性和适应性免疫反应的协调和整合。 细胞质中作为免疫原核酸的传感器和/或伴侣,涉及TLR9介导的免疫反应的激活,并介导自噬。 作为危险相关分子模式(DAMP)分子,在组织损伤期间增强免疫反应。 释放到细胞外环境可以结合DNA、核小体、IL-1β、CXCL12、AGER亚型2/sRAGE、脂多糖(LPS)和脂磷壁酸(LTA),并通过多种表面受体的参与激活细胞。 在细胞外室中,完全减少的HMGB1(由坏死释放)作为趋化因子,二硫键HMGB1作为细胞因子(积极分泌),磺酰HMGB1则(由凋亡细胞释放)促进免疫耐受(PubMed:23519706,PubMed:33446148,PubMet:23994764,PubMer:25048472)。 具有促血管生成活性(根据相似性)。 可能参与血小板活化(通过相似性)。 与磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇酰胺结合(通过相似性)。 与RAGE结合介导神经元生长信号(通过相似性)。 可能在扩大聚谷氨酰胺(polyQ)蛋白质的积累中发挥作用,例如亨廷顿蛋白(HTT)或TBP(PubMed:23303669,PubMed:25549101)。 核功能归因于HGMB1的完全降低。 与染色质结合并结合DNA,优先选择非标准DNA结构,如单链DNA、含DNA的十字形或弯曲结构、超螺旋DNA和ZDNA。 可以弯曲DNA并通过环化增强DNA的灵活性,从而通过增强转录因子结合和/或使远程调控序列接近,提供一种机制来促进各种基因启动子的活性(PubMed:20123072)。 可能在核苷酸切除修复(NER)中起增强作用(通过相似性)。 然而,使用体外系统对NER的影响已被报道为相互矛盾(PubMed:19446504,PubMed:19360789)。 可能参与错配修复(MMR)和基底切除修复(BER)通路(PubMed:15014079,PubMed:16143102,PubMet:17803946)。 可能参与双绞线断裂修复,如非同源端接(NHEJ)(通过相似性)。 作为RAG复合体的辅因子参与V(D)J重组:通过刺激保守重组信号序列(RSS)23 bp间隔区的裂解和RAG蛋白结合发挥作用(通过相似性)。 体外可以从高度弯曲的DNA中置换组蛋白H1(根据相似性)。 可以重组标准核小体,导致转录因子结合的结构约束放松(通过相似性)。 增强固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)(如SREBF1)与其同源DNA序列的结合,并增加其转录活性(通过相似性)。 促进TP53与DNA的结合(PubMed:23063560)。 建议以与HSPB1相关的转录依赖方式参与线粒体质量控制和自噬; 然而,这一功能受到了质疑(通过相似性)。 可以调节端粒酶复合体的活性,并可能参与端粒的维持。 在细胞质中,建议通过与BECN1的竞争性相互作用分离BECN1:BCL2复合物,导致自噬激活(PubMed:20819940)。 参与氧化应激介导的自噬(PubMed:21395369)。 可以保护BECN1和ATG5免受钙蛋白酶介导的分裂,从而控制其促自噬和促凋亡功能,并调节炎症相关细胞损伤的程度和严重程度(通过相似性)。 在髓系细胞中,通过促进自噬对内毒素血症和细菌感染具有保护作用(通过相似性)。 参与巨噬细胞内体易位和TLR9对CpG DNA的激活。 细胞外室(主动分泌或被动释放后)参与炎症反应的调节。 完全降低的HGMB1(释放后会被氧化)与CXCL12相关,在组织损伤的初始阶段介导炎症细胞的募集; CXCL12:HMGB1复合物触发CXCR4同二聚化(PubMed:22370717)。 诱导单核细胞衍生的未成熟树突状细胞的迁移,并似乎调节与AGER/RAGE和ITGAM相关的中性粒细胞的粘附和迁移功能(通过相似性)。 可结合各种类型的DNA和RNA,包括微生物非甲基化CpG-DNA,以增强对核酸的先天免疫反应。 建议在混杂的DNA/RNA传感中发挥作用,该传感与特定模式识别受体随后的区分传感相配合(通过相似性)。 促进与AGER/RAGE相关的细胞外DNA诱导的AIM2炎症小体激活(PubMed:24971542)。 二硫HMGB1与跨膜受体结合,如AGER/RAGE、TLR2、TLR4和可能的TREM1,从而激活其信号转导途径。 调节细胞因子/趋化因子的释放,如TNF、IL-1、IL-6、IL-8、CCL2、CCL3、CCL4和CXCL10(PubMed:12765338,PubMed:18354232,PubMet:19264983,PubMed:20547845,PubMed:24474694)。 促进巨噬细胞刺激的自然杀伤(NK)细胞与其他细胞因子如IL-2或IL-12协同分泌干扰素-γ(PubMed:15607795)。 TLR4被认为是促进巨噬细胞活化的主要受体,通过TLR4进行信号传递似乎与LY96/MD-2有关(PubMed:20547845)。 在细菌LPS或LTA介导的炎症反应中,炎症反应与内毒素结合,并将其转移到CD14,以向相应的TLR4:LY96和TLR2复合物发出信号(PubMed:18354232,PubMed:21660935,PubMet:25660311)。 通过与ACER/RAGE的关联促进肿瘤增殖(通过相似性)。 可与IL1β结合,并通过IL1R1:IL1RAP受体复合物发出信号(PubMed:18250463)。 与A类CpG结合可激活浆细胞样树突状细胞中的细胞因子产生,涉及TLR9、MYD88和AGER/RAGE,并可激活自身反应性B细胞。 通过含HMGB1的染色质免疫复合物,还可以通过B细胞受体(BCR)依赖性和ACER/RAGE依赖性机制(通过相似性)促进B细胞对内源性TLR9配体的反应。 抑制巨噬细胞吞噬凋亡细胞; 该功能依赖于多聚腺苷二磷酸核糖化,并与凋亡细胞细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合(根据相似性)。 适应性免疫可能通过激活效应T细胞和抑制调节性T(TReg)细胞来增强免疫(PubMed:15944249,PubMed:22473704)。 相反,在不涉及效应或调节性T细胞的情况下,表达淋巴毒素LTA:LTB异源三聚体的T细胞需要肿瘤浸润和激活,从而促进肿瘤恶性进展(通过相似性)。 也有报道限制T细胞增殖(根据相似性)。 释放HMGB1:凋亡过程中形成的核小体复合体可以通过TLR2发出信号,诱导细胞因子产生(PubMed:19064698)。 参与通过凋亡细胞诱导免疫耐受; 当凋亡细胞释放其促炎活性时,活性氧物种(ROS)依赖的氧化作用(特别是Cys-106)可中和其促炎作用(PubMed:18631454)。 在巨噬细胞活化过程中,活化的淋巴细胞衍生的自凋亡DNA(ALD-DNA)促进ALD-DNA向内体的募集。 -
组织特异性 无处不在。 以血小板表达(PubMed:11154118)。 -
序列相似性 属于HMGB家族。 包含2个HMG盒DNA绑定域。 -
结构域 HMG盒2介导促炎细胞因子刺激活性并与TLR4结合(PubMed:12765338,PubMed:20547845)。 然而,在凋亡诱导免疫耐受的背景下,不参与介导免疫原活性(PubMed:24474694)。 酸性C末端结构域形成一个柔性结构,可以与HMG盒在分子内可逆地相互作用,并调节与DNA和其他蛋白质的结合(PubMed:23063560)。 -
翻译后修饰 丝氨酸残基磷酸化。 NLS两个区域的磷酸化是细胞质易位和分泌所必需的(PubMed:17114460)。 LPS刺激后在多个部位乙酰化(PubMed:22801494)。 核定位信号(NLS1和NLS2)中赖氨酸残基的乙酰化导致细胞质定位和随后的分泌(通过相似性)。 Lys-3上的乙酰化导致优先结合DNA末端并削弱DNA弯曲活性。 半胱氨酸残基Cys-23、Cys-45和Cys-106的还原/氧化以及可能涉及Cys-23和Cys-45的分子内二硫键在不同的细胞区室中产生具有特定功能活性的不同氧化还原形式:1-完全还原的HMGB1(HMGB1C23hC45hC106h)、2-二硫HMGB1(HMGB1C23-C45C106h) 和3-磺酰基HMGB1(HMGB1C23soC45soC106so)。 LPS刺激后分泌的PARP1可使多聚ADP-核糖化。 CASP1的体外裂解释放出一种含有HMG盒1的肽,该肽可能介导免疫原性活性; 该肽拮抗凋亡诱导的免疫耐受(PubMed:24474694)。 可被凝血酶水解:血栓调节蛋白复合物; 减少与肝素的结合和促炎活性。 -
细胞定位 核心。 染色体。 细胞质。 保密。 细胞膜。 内体。 内质网-高尔基体中间隔室。 基态主要为核。 在细胞质和细胞核之间穿梭(PubMed:12231511,PubMed:17114460)。 在自噬刺激下从细胞核转移到细胞质(PubMed:20819940)。 巨噬细胞在细胞外环境中的释放需要激活NLRC4或NLRP3炎性体(根据相似性)。 通过扩散将坏死细胞被动释放至细胞外环境,包括完全还原的HGMB1,随后被氧化(PubMed:19811284)。 也由凋亡细胞释放(PubMed:16855214,PubMed:18631454)。 各种免疫细胞和非免疫细胞(如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞)对各种刺激(如脂多糖和细胞因子)的主动分泌涉及通过分泌溶酶体的非常规分泌过程(PubMed:12231511,PubMed:14532127,PubMet:15944249)。 由浆细胞响应LPS分泌的(通过相似性)。 发现于活化血小板表面(PubMed:11154118)。 -
UniProt提供的信息 -
别名 神经轴突生长因子 染色体蛋白,非组蛋白,HMG1 DKFZp686A04236号
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应用
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车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: HMGB1敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约92310 在30 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约92310 western blot显示重组抗-HMGB1抗体[EPR3506]与野生型HeLa细胞中的HMGB1特异性反应。 敲除细胞系时观察到预期大小的信号丢失 约255395 使用敲除细胞裂解物ab263782。 在25kDa以下的通道2中观察到的带可能代表截断形式和劈开碎片。 对野生型和HMGB1敲除的样品进行SDS-PAGE。 将膜在室温下用3%脱脂奶粉在0.1%TBST中封闭1小时。 约92310 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4点孵育过夜 ° C分别为1000稀释度和20000稀释度的1。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物(20µg) 车道2: HMGB1敲除HeLa细胞裂解物(20µg) 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约79823 在30 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在37 kDa时观察到。 约79823 western blot显示重组抗-HMGB1抗体[EPR3507]与野生型HeLa细胞中的HMGB1特异性反应。 敲除细胞系时观察到预期大小的信号丢失 约255395 使用敲除细胞裂解物ab263782。 在25kDa以下的通道2中观察到的带可能代表截断形式和劈开碎片。 对野生型和HMGB1敲除的样品进行SDS-PAGE。 将膜在室温下用3%脱脂奶粉在0.1%TBST中封闭1小时。 约79823 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4点孵育过夜 ° C分别为10000倍和20000倍。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附( 邮编:216773 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:第2外显子1 bp缺失
实验方案
数据表及文件
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