概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HCT116型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子3中8 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 建议控制: 人野生型HCT116细胞系( ab255451型 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: McCoY5a+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬浮液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)洗涤小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 科隆 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:10、11 D13S317:10、12 d7第820页:11,12 第16天第539页:第11页,第13页 vWA:17、22 TH01:8、9 TPOX:8、9 CSF1PO:7、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 作为缺氧适应性反应的主转录调节器发挥作用。 在缺氧条件下,激活40多个基因的转录,包括促红细胞生成素、葡萄糖转运蛋白、糖酵解酶、血管内皮生长因子和其他蛋白产物增加氧气输送或促进代谢适应缺氧的基因。 在胚胎血管生成、肿瘤血管生成和缺血性疾病的病理生理学中发挥重要作用。 与靶基因启动子缺氧反应元件(HRE)内的核心DNA序列5'-[AG]CGTG-3'结合。 激活需要招募转录辅激活物,如CREBPB和EP300。 活动通过与NCOA1或NCOA2两者的交互增强。 与氧化还原调节蛋白APEX的相互作用似乎激活了CTAD,并增强了NCOA1和CREBBP的激活。 -
组织特异性 在肾脏和心脏中含量最高的大多数组织中表达。 由于肿瘤内缺氧以及编码癌蛋白和抑癌基因突变,在大多数常见人类癌症及其转移瘤中过度表达。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 包含1个PAC(PAS-associated C-terminal)域。 包含2个PAS(PER-ARNT-SIM)域。 -
结构域 包含两个独立的C末端交易激活域,NTAD和CTAD,它们协同工作。 它们的转录活性受到干预抑制域(ID)的抑制。 -
翻译后修饰 在常氧条件下,通过EGLN1/PHD1和EGLN2/PHD2在氧依赖降解域(ODD)的Pro-402和Pro-564上羟基化。 EGLN3/PHD3也显示为羟基化Pro-564。 羟基脯氨酸促进与VHL的相互作用,启动快速泛素化和随后的蛋白酶体降解。 USP20脱去泛素。 在缺氧条件下,脯氨酸羟基化受损,泛素化减弱,导致稳定。 在常氧条件下,HIF1AN在Asn-803上羟基化,从而消除与CREBBP和EP300的相互作用并阻止转录激活。 这种羟基化被Cu/Zn-亲水体Clioquinol抑制。 Cys-800的S-亚硝基化可能是增加HIF-1复合物转录活性所必需的p300辅活化子的募集的原因。 DNA结合需要磷酸化。 磺酰化; 缺氧条件下SUMO1。 Sumoylation通过与RWDD3的相互作用而增强。 SENP1的去甲酰化导致HIF1A稳定性和转录活性增加。 泛素化; 在常压下,在羟基化和与VHL相互作用后。 Lys-532似乎是泛素化的主要位点。 Clioquinol是Cu/Zn的亲合物,通过阻止Asn-803的羟基化来抑制泛素化。 天冬酰胺的铁和2-酮戊二酸依赖性3-羟基化在HIF-CTAD结构域内具有(S)立体特异性。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 常氧状态下的细胞质,缺氧反应中的核移位。 低氧条件下,在细胞核中与SUMO1进行结肠酸化。 -
UniProt提供的信息
应用
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图片
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所有车道: 抗-HIF-1α抗体[54/HIF-1a]( ab279654磅 )稀释1/2000 车道1: 野生型HCT 116未经处理的DMOG对照细胞裂解物 车道2: 野生型HCT 116处理的DMOG(1 mM,4 h)细胞裂解物 3号车道: HIF1A敲除HCT 116未经处理的DMOG对照细胞裂解物 车道4: HIF1A敲除HCT 116处理的DMOG(1 mM,4 h)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 Western blot假彩色图像:1/2000稀释度下抗-HIF-1α抗体[54/HIF-1a]染色,以绿色显示; 兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y]( 约52866 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约279654 被证明与HIF-1α特异性结合。 在处理过的野生型HCT 116细胞裂解液中在110 kDa处观察到一条带,在HIF1A敲除细胞系ab255394(敲除细胞裂解液 约263860 ). 为了生成此图像,分析了野生型和HIF1A敲除HCT 116细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )稀释1/20000。 -
纯合子:第3外显子8 bp缺失
数据表及文件
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SDS下载 -
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