概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子2插入1 bp,外显基因2缺失4 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
规则说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( ab255450磅 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌症 -
性别 男性 -
STR分析 Amelogenin X、Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8、11 D16S539:11、12 vWA:14个 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
新冠肺炎疫苗
靶标
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功能 对单核细胞和T淋巴细胞具有趋化性。 绑定到CXCR3。 -
序列相似性 属于海间α(趋化因子CxC)家族。 -
翻译后修饰 CXCL10(1-73)是在角质形成细胞分泌后通过蛋白水解切割产生的。 -
细胞定位 保密。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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生物化学制品 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗IP10抗体[EPR20764]( 约214668 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IFN-y( ab259377号 )(100 ng/ml,32小时)和TNF-α( 约259410 )(10纳克/毫升,32小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IP10淘汰赛A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道4: IP10淘汰赛A549 IFN-y( ab259377号 )(100ng/ml,32h)和TNF-α( 约259410 )(10ng/ml,32h)和布雷费尔丁A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 车道5: THP-1布雷菲尔丁A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,6h)细胞裂解物 车道6: THP-1干扰素-y( ab259377号 )(200ng/ml,24h)和LPS(50ng/ml、24h)-处理24小时,以及Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(最后6h为5ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 10千Da 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-6: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约214668 在11 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约214668 western blot显示在野生型A549细胞中与IP10反应,在IP10敲除细胞系ab266971(敲除细胞裂解物 约256888 ). 对野生型和IP10敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约214668 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释度分别为1/1000和1/2000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IP10抗体[EPR24674-12]( ab283681磅 )稀释度为1/1000 车道1: 未经处理的野生型A549(人肺癌上皮细胞),全细胞裂解液浓度为40µg 车道2: 用100 ng/ml IFN-y处理的野生型A549( ab259377号 )32小时和10 ng/m TNF-α( 约259410 )32小时,5微克/毫升布雷费尔丁A( 约120299 )在最后6小时内,全细胞以40µg的浓度裂解 3号车道: 40µg时未经处理的IP10敲除A549全细胞裂解物 车道4: 用100 ng/ml IFN-y处理IP10敲除A549( ab259377号 )32小时和10 ng/m TNF-α( 约259410 )32小时,5微克/毫升布雷费尔丁A( 约120299 )在最后6小时内,全细胞以40µg的浓度裂解 车道5: 未经处理的THP-1(人单核细胞白血病单核细胞),20µg全细胞裂解液 车道6: 用200ng/ml IFN-y处理THP-1( ab259377号 )24小时,50ng/ml LPS 24小时,5ug/ml Brefeldin A过去21小时,全细胞在20µg 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye®800CW)( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 10千Da 观察到的频带大小: 11千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 1-6车道 :合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约283681 在11 kDa时观察到。 红色加载控制 约8245 在36 kDa下观察到(GAPDH的小鼠单克隆抗体[6C5])。 ab283681磅 在处理过的野生型A549细胞中,抗TNF受体I抗体[EPR24674-12]与IP10特异性反应。 当IP10敲除细胞系ab266971(敲除细胞裂解物 约256888 )使用了。 对野生型和IP10敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约283681 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别以1000倍和20000倍的比例在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以万分之一的比例稀释1小时。 -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透性CXCL10 KO A549(ab266971)细胞的免疫荧光分析 约283681 稀释1/50(12.86 ug/ml),然后 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体,稀释度为1/1000(2 ug/ml)(绿色)。 用干扰素-γ(200 ng/ml)和脂多糖(50 ng/ml。 约195889年 使用抗α-Tubulin小鼠单克隆抗体-微管标记(Alexa-Fluro®594)在1/200(2.5 ug/ml)稀释度(红色)下对微管蛋白进行反染色。 核染色为DAPI(蓝色)。 仅二级抗体对照:二级抗体为 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000(2 ug/ml)稀释度预先吸附。 -
等位基因1:第2外显子4 bp缺失 -
等位基因2:外显子2插入1 bp。 -
典型图像CXCL10敲除A549细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)和野生型A549细胞,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS M5000显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载