概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:在外显子2中插入选择盒 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 第7天第820天:11 第16天第539页:第9页,第13页 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 可能参与调节T细胞介导的免疫反应。 可以通过抑制自然杀伤介导的细胞裂解对肿瘤细胞起保护作用,也可以作为检测神经母细胞瘤细胞的标志物。 可能参与急性和慢性移植排斥反应的发展以及粘膜表面淋巴细胞活性的调节。 也可以在整个妊娠期为胎盘和胎儿提供合适的免疫环境中发挥关键作用。 亚型1和亚型2调节CD4 T细胞反应的能力似乎是多余的。 异构体2被证明能增强细胞毒性T细胞的诱导,并在T细胞受体信号的存在下选择性刺激干扰素γ的产生。 -
组织特异性 无处不在,但在外周血淋巴细胞或粒细胞中检测不到。 在休眠单核细胞中弱表达。 在来源于单核细胞的树突状细胞中表达。 在鼻窦组织的上皮细胞中表达。 在妊娠早期胎盘和足月胎盘的绒毛外滋养层细胞和Hofbauer细胞中表达。 -
序列相似性 属于免疫球蛋白超家族。 BTN/MOG系列。 包含2个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 包含2个Ig样V型(免疫球蛋白样)结构域。 -
细胞定位 膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗CD276抗体[SP206]( 约227670 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: CD276敲除HEK293T细胞裂解物 3号车道: LNCaP细胞裂解物 车道4: Raji细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 57千Da 观察到的频带大小: 90-110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约227670 在90-110 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约227670 在野生型HEK293T细胞中,抗CD276抗体[SP206]与CD276特异性反应。 当敲除细胞系ab266658(敲除细胞裂解物 ab257097号 )已使用。 对野生型和CD276敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约227670 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
ab227679号 野生型HEK293细胞中CD276染色(顶部面板)和CD276敲除的HEK299细胞(ab266658)(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab227679号 稀释度为1/100 约7291 (小鼠对α-微管蛋白的单克隆抗体),在4°C下稀释1/1000过夜,然后在室温下与山羊对兔IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型HEK293(绿线)和CD276敲除的HEK292细胞(ab266658) ab134161号 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab134161号 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( 约150081 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同型对照抗体为兔IgG(单克隆)( 约172730 )在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型HEK293-黑线CD276 HEK292敲除-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
所有车道: 抗CD276抗体[EPR20115]( 约219648 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: CD276敲除HEK293T细胞裂解物 3号车道: LNCaP细胞裂解物 车道4: Raji细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 57千Da 观察到的频带大小: 90-110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约219648 在90-110 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约219648 抗CD276抗体[EPR20115]在野生型HEK293T细胞中与CD276特异性反应。 敲除细胞系ab266658(敲除细胞裂解物 ab257097号 )已使用。 对野生型和CD276敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约219648 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
ab134161号 野生型HEK293细胞中CD276染色(顶部面板)和CD276敲除的HEK299细胞(ab266658)(底部面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab134161 浓度为1μg/ml 约7291 (小鼠对α-微管蛋白的单克隆抗体),在4°C下稀释1/1000过夜,然后在室温下与山羊对兔IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型HEK293(绿线)和CD276敲除的HEK292细胞(ab266658) 约89133 (红线)。 将细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用,然后是抗体( 约89133 )(1x10个 6 100μl,0.2μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型HEK293-黑线CD276 HEK292敲除-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
纯合子:选择盒插入外显子2 -
CD276敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HEK293 T细胞的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
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