概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:在第5外显子中插入78 bp,引入过早的STOP密码子 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
规则说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约275463 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌症 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
新冠肺炎疫苗
靶标
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功能 在精子发生、胚胎植入、神经网络形成和肿瘤进展中发挥关键作用。 刺激邻近的成纤维细胞产生基质金属蛋白酶(MMPS)。 可能将单羧酸转运体SLC16A1、SLC16A3和SLC16A8靶向视网膜色素上皮和神经视网膜的质膜。 似乎是寡甘露糖聚糖的受体。 在体外,促进星形细胞突起的生长。 -
组织特异性 仅存在于大脑非肿瘤区域的血管内皮细胞中,而存在于肿瘤细胞中,但不存在于恶性胶质瘤的增殖血管中。 -
序列相似性 包含1个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 包含1个Ig样V型(免疫球蛋白样)结构域。 -
翻译后修饰 N-糖基化。 -
细胞定位 细胞膜。 褪黑激素组。 与SLC16A1和SLC16A8配色(根据相似性)。 通过质谱鉴定第一阶段至第四阶段的黑素体组分。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图片
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所有车道: 抗CD147抗体[MEM-M6/1]( ab666型 )浓度为1µg/ml 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: BSG敲除A549细胞裂解物 3号车道: Raji细胞裂解物 车道4: Jurkat细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 42千帕 观察到的频带大小: 55-70千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab666型 在55-70 kDa时观察到。 红色-加载控制 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在55kDa下观察到。 ab666型 western blot显示与野生型A549细胞中的CD147反应,BSG敲除细胞系ab273748(敲除细胞裂解物 275500英镑 ). 对野生型和BSG敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 ab666型 和 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])分别在4°C、1µg/ml和1:20000稀释液中过夜。 印迹与山羊抗鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术叠加直方图显示野生型A549(绿线)和BSG敲除A549细胞(ab273748)用 ab666型 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab666型 )(1x10个 6 100μl,10μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线;BSG敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
根据EMMPRIN(CD147)标准曲线插值人CD147浓度。 来自细胞培养样品的上清液被连续稀释,并通过人EMMPRIN-ELISA试剂盒进行评估( 公元219631年 ). 对野生型和CD147敲除的A549细胞(ab273748)进行重复评估(n=2); Jurkat细胞和Raji细胞分别作为阳性和阴性对照(n=1)。 如果样本重复运行,则数据表示为平均值,误差条表示标准偏差。 -
所有车道: 抗CD147抗体[EPR4053]( 约108308 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: BSG敲除A549细胞裂解物 3号车道: Raji细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 42千帕 观察到的频带大小: 42-70千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约108308 在42-70 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约108308 western blot显示与野生型A549细胞中的CD147反应,BSG敲除细胞系ab273748(敲除细胞裂解物 275500英镑 ). 对野生型和BSG敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约108308 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗CD147抗体[OTI9B10]( ab119020号 )稀释1/2000 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: BSG敲除A549细胞裂解物 3号车道: Raji细胞裂解物 车道4: Jurkat细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 42千帕 观察到的频带大小: 55-70千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab119020号 在55-70 kDa时观察到。 红色-加载控制 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在55kDa下观察到。 ab119020号 western blot显示与野生型A549细胞中的CD147反应,BSG敲除细胞系ab273748(敲除细胞裂解物 275500英镑 ). 对野生型和BSG敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 ab119020号 和 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在4°C下过夜,稀释度分别为1:2000和1:20000。 印迹与山羊抗鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗CD147抗体[10E10]( ab230921型 )稀释1/500 车道1: 野生型A549细胞裂解物 车道2: BSG敲除A549细胞裂解物 3号车道: Raji细胞裂解物 车道4: Jurkat细胞裂解物 每个泳道30µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 42千帕 观察到的频带大小: 42-70千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab230921型 在42-70 kDa时观察到。 红色-加载控制 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在55kDa下观察到。 ab230921型 western blot显示与野生型A549细胞中的CD147反应,BSG敲除细胞系ab273748(敲除细胞裂解物 275500英镑 ). 对野生型和BSG敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 ab230921型 和 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])分别以1/500和1/20000的稀释度在4°C下过夜。 印迹与山羊抗鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和BSG敲除A549细胞(ab273748) 约194401 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( 约194401 )(1x10个 6 100μl,10μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线;BSG敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和BSG敲除A549细胞(ab273748) 约91147 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( 约91147 )(1x10个 6 100μl,10μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线;BSG敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和BSG敲除A549细胞(ab273748) ab21903号 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab21903号 )(1x10个 6 100μl,5μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG2bκ( 约170192 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线;BSG敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型A549(绿线)和BSG敲除A549细胞(ab273748) ab230921型 (红线)。 细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( ab230921型 )(1x10个 6 100μl,5μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线;BSG敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
等位基因-1:78bp插入外显子5引入过早STOP密码子。
数据表及文件
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