概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子1插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 桑格测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.将小瓶在37°C水浴中解冻约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供能够在复活时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾脏 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 Amelogenin X蛋白 D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 第01页:第7页,第9.3页 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 I类主要组织相容性复合体(MHC)的成分。 参与向免疫系统呈现肽抗原。 -
疾病相关 B2M缺陷是高分解代谢性低蛋白血症(HYCATHYP)的原因[MIM:241600]。 受影响个体的血清免疫球蛋白和白蛋白浓度显著降低,可能是由于快速降解。 注:β-2-微球蛋白在某些病理状态下可能采用淀粉样蛋白的纤维形态。 聚集成淀粉样纤维的能力取决于浓度。 长期血液透析患者持续高β(2)-微球蛋白血清水平会导致淀粉样变。 -
序列相似性 属于β-2-微球蛋白家族。 包含1个Ig样C1型(免疫球蛋白样)结构域。 -
翻译后修饰 在长期血液透析患者中观察到Ile-21糖化。 -
细胞定位 保密。 在血清和尿液中检测到。 -
UniProt提供的信息
应用
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图片
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所有车道: 抗β2微球蛋白抗体[EP2978Y]( 约75853 )稀释1/5000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: B2M敲除HEK-293T细胞裂解物 3号车道: 野生型A431细胞裂解物 车道4: B2M敲除A431细胞裂解物 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 12千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗β2微球蛋白抗体[EP2978Y]1/5000稀释染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约75853 β2微球蛋白特异性结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中在12kDa处观察到一条带,在B2M敲除细胞系ab266828(敲除细胞裂解液 约256845 ). 为了生成此图像,对野生型和B2M敲除HEK-293T细胞裂解物进行了分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗β2微球蛋白抗体[EPR21752-214]( 约218230 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道2: B2M敲除HEK-293T细胞裂解物 3号车道: 野生型A431细胞裂解物 车道4: B2M敲除A431细胞裂解物 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 12千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 蛋白质印迹的假彩色图像:1/1000稀释的抗β2微球蛋白抗体[EPR21752-214]染色,显示为绿色; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约218230 被证明与β2微球蛋白特异结合。 在野生型HEK-293T细胞裂解液中在12kDa处观察到一条带,在B2M敲除细胞系ab266828(敲除细胞裂解液 约256845 ). 为了生成此图像,对野生型和B2M敲除HEK-293T细胞裂解物进行了分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
测序色谱图显示外显子1的序列编辑 -
纯合子:外显子1插入1 bp -
B2M敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(分别位于左上角和右上角)和野生型HEK293 T细胞的代表性图像、低汇流和高汇流示例(分别于左下角和右下角)显示了典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载