主要功能和细节
组蛋白H3(三甲基K27)-ChIP级小鼠单克隆抗体[mAbcam 6002] 适用于:ChIP、ELISA、WB、IHC-批发、ICC/IF 反应对象:小鼠、奶牛、人类、重组片段 同位素:IgG3
(美国)
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产品名称 -
描述 小鼠单克隆抗体 [mAbcam 6002]至组蛋白H3(三甲基K27)-ChIP级 -
宿主 鼠标 -
土耳其 该抗体对K27三甲基化的组蛋白H3具有特异性。 在Western blot中,抗体被三甲基K27肽阻断,并被二甲基K27肽类轻微阻断(ELISA测定,与二甲基K27<12%的交叉反应性)。 它不被单甲基K4、二甲基K4,三甲基K4和单甲基K9,二甲基K9和三甲基K9、单甲基K27或未经修饰的K27肽阻断(见下面的肽阻断分析印迹)。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 小鼠、奶牛、人类、重组片段 预测可用于: 大鼠、兔子、鸡、非洲爪蟾、拟南芥、果蝇、植物、斑马鱼、恒河猴、中国仓鼠、大米 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 (肽可用作 公元1782年 ) -
阳性对照 WB:小牛胸腺组蛋白制备核裂解物、HeLa细胞裂解物、小鼠ES全细胞裂解物 ChIP:HeLa细胞和K562细胞。 ICC/IF:HeLa细胞。 IHC-全数:囊胚和生殖细胞以及在多能干细胞中培养。 ELISA:组蛋白H3-三甲基K27肽。
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常规说明 该抗体克隆由Abcam制造。 如果您需要为您的实验定制缓冲配方或共轭物,请联系 orders@abcam.com . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买之前向我们发送查询和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C或-80°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS,6.97%L-精氨酸 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 单抗6002 -
同种型 IgG3 -
轻链类型 卡帕 -
研究领域
产品
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ChIP相关产品 -
兼容的辅助设备 -
免疫肽(阻断) -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
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应用
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靶标
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功能 核小体的核心成分。 核小体将DNA包裹并压缩成染色质,限制了需要DNA作为模板的细胞机制对DNA的访问。 因此,组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥着核心作用。 DNA可及性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白密码)和核小体重塑来调节的。 -
序列相似性 属于组蛋白H3家族。 -
发展阶段 在S期表达,然后随着分化过程中细胞分裂减慢,表达强烈下降。 -
翻译后修饰 乙酰化通常与基因激活有关。 Lys-10(H3K9ac)上的乙酰化破坏Arg-9(H3R8me2s)的甲基化。 Lys-19(H3K18ac)和Lys-24(H3K24ac)上的乙酰化有利于Arg-18(H3R17me)上的甲基化。 PADI4在Arg-9(H3R8ci)和/或Arg-18(H3R17ci)处的瓜氨酸化会损害甲基化并抑制转录。 CARM1在Arg-18(H3R17me2a)处的不对称二甲基化与基因激活有关。 PRMT5在Arg-9(H3R8me2s)处的对称二甲基化与基因抑制有关。 PRMT6在Arg-3(H3R2me2a)处的不对称二甲基化与基因抑制有关,并且与H3 Lys-5甲基化(H3K4me2和H3K4me3)相互排斥。 H3R2me2a存在于基因的3'处,无论其转录状态如何,它在非活性启动子上富集,而在活性启动子中不存在。 Lys-5(H3K4me)、Lys-37(H3K36me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化与基因激活有关。 Lys-5(H3K4me)的甲基化促进H3和H4的后续乙酰化。 Lys-80甲基化(H3K79me)与DNA双链断裂(DSB)反应相关,是TP53BP1的特异靶点。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化与基因抑制有关。 Lys-10的甲基化(H3K9me)是HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)的特异性靶标,并阻止随后Ser-11的磷酸化(H3S10ph)和H3和H4的乙酰化。 Lys-5(H3K4me)和Lys-80(H3K 79me)的甲基化需要H2B在“Lys-120”的初步单泛素化。 Lys-10(H3K9me)和Lys-28(H3K27me)的甲基化富集在非活性X染色体染色质中。 前期GSG2/haspin在Thr-4(H3T3ph)下磷酸化,后期去磷酸化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化对有丝分裂和减数分裂期间的染色体凝聚和细胞周期进展至关重要。 此外,RPS6KA4和RPS6KA5在Ser-11(H3S10ph)处的磷酸化在间期很重要,因为它能够在外界刺激后转录基因,如丝裂原、应激、生长因子或紫外线照射,并导致基因的激活,如c-fos和c-jun, 与基因激活相关,防止Lys-10(H3K9me)甲基化,但促进H3和H4的乙酰化。 AURKB在Ser-11(H3S10ph)的磷酸化介导HP1蛋白(CBX1、CBX3和CBX5)与异染色质的分离。 Ser-11的磷酸化(H3S10ph)也是肿瘤细胞转化的重要调节机制。 在有丝分裂期间或紫外线B照射下,MLTK亚型1、RPS6KA5或AURKB在Ser-29(H3S28ph)下磷酸化。 PRKCBB在Thr-7(H3T6ph)处的磷酸化是表观遗传转录激活的特异标记,可防止LSD1/KDM1A对Lys-5(H3K4me)的去甲基化。 在着丝粒处,DAPK3和PKN1在Thr-12(H3T11ph)从前期到后期的早期特异性磷酸化。 PKN1在Thr-12(H3T11ph)处的磷酸化是促进KDM4C/JMJD2C对Lys-10(H3K9me)去甲基化的表观遗传转录激活的特异标记。 JAK2在Tyr-42(H3Y41ph)下的磷酸化促进CBX5(HP1α)从染色质中排除。 RAG1在淋巴细胞中单泛素化,V(D)J重组需要单泛素(根据相似性)。 CUL4-DDB-RBX1复合物对紫外线照射的反应中泛素化。 这可能会削弱组蛋白和DNA之间的相互作用,并促进DNA可接近性以修复蛋白质。 -
细胞定位 核心。 染色体。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 8350 人类 Entrez基因: 8351 人类 Entrez基因: 8352 人类 Entrez基因: 8353 人类 Entrez基因: 8354 人类 Entrez基因: 8355 人类 Entrez基因: 8356 人类 Entrez基因: 8357 人类
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别名 H3组蛋白家族成员E假基因抗体 H3组蛋白家族成员A抗体 H3/A抗体
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图片
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所有车道: 抗-Histone H3(三甲基K27)抗体[mAbcam 6002]-ChIP等级(ab6002),1µg/ml 车道1: 小牛胸腺组蛋白制备核裂解物 车道2: 用人组蛋白H3肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 公元17163年 )0.5µg/ml 3号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( ab1340型 )0.5µg/ml 车道4: 用人组蛋白H3(二甲基K4)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约7768 )0.5µg/ml 车道5: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K4)肽( ab1342年 )0.5µg/ml 车道6: 用人组蛋白H3(单甲基K9)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( ab1771年 )0.5µg/ml 7号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K9)肽( 公元1772年 )0.5微克/毫升 第8车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K9)肽( 公元1773年 )0.5µg/ml 9号车道: 用人组蛋白H3(单甲基K27)肽制备小牛胸腺组蛋白核裂解物( 约1780年 )0.5µg/ml 10号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(二甲基K27)肽( 公元1781年 )0.5µg/ml 11号车道: 小牛胸腺组蛋白核裂解物的制备 人组蛋白H3(三甲基K27)肽( 公元1782年 )0.5µg/ml 每车道0.25µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 预先吸附的山羊抗小鼠IgG H&L(HRP)( 约97040 )稀释1/50000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 3分钟 该印迹是在MES缓冲系统下使用4-12%双三凝胶生成的。 凝胶在200V下运行35分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后使用3%的牛奶将膜封闭一小时,然后在4°C下与ab6002孵育过夜。 使用与HRP结合的抗鼠抗体检测抗体结合,并使用ECL显影液进行可视化 约133406 . -
在小鼠中,X失活过程通过胚泡和生殖细胞中的X再激活以及多能干细胞培养中的X重新激活而自然逆转。 图中显示了晚期囊胚期小鼠胚胎由三种细胞类型组成:外胚层(NANOG阳性,青色)、原始内胚层(GATA4阳性,红色)和滋养层(CDX2阳性,绿色)。 非活性X染色体(H3K27me3阳性,黄色点)仅在外胚层(没有黄色点的细胞)中重新激活,外胚层将形成胚胎。 生殖细胞因子PRDM14和长非编码RNA Tsix在胚泡和多能干细胞的X再激活过程中协同作用,从而将表观遗传学与细胞重编程事件联系起来。 图片由2017年免疫荧光成像比赛的亚军伯恩哈德·佩耶提供。 -
对所有批次的ab6002进行ELISA测试,以对抗不同组蛋白H3修饰的肽。 结果显示与组蛋白H3-三甲基K27肽有强结合( 公元1782年 ),表明该抗体特异性识别组蛋白H3三甲基K27修饰。 组蛋白H3二甲基K27修饰也检测到弱结合(<12%)( 公元1781年 ). 约17163 -组蛋白H3-未修饰 ab1340型 -组蛋白H3-单甲基K4 约7768 -组蛋白H3-二甲基K4 ab1342年 -组蛋白H3-三甲基K4 ab1771年 -组蛋白H3-单甲基K9 公元1772年 -组蛋白H3-二甲基K9 公元1773年 -组蛋白H3-三甲基K9 约1780年 -组蛋白H3-单甲基K27 公元1781年 -组蛋白H3-二甲基K27 公元1782年 -组蛋白H3-三甲基K27 -
根据Abcam X-ChIP协议从Hela细胞制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。用25µg染色质、5µg ab6002(蓝色)和20µl蛋白A/g sepharose珠进行ChIP。 未向珠子对照组(黄色)添加抗体。 免疫沉淀DNA通过实时PCR(Taqman方法用于活性和非活性位点,Sybr green方法用于异色位点)进行定量。 引物和探针位于转录区的第一kb。 -
图中显示了H3(三甲基K27)抗体ab6002在a)46染色体XX细胞系和b)49染色体XXXXX细胞系中的核分布。 非活性X染色体上兼性异染色质的位置用白色箭头表示。 -
1-3车道: 抗-Histone H3(三甲基K27)抗体[mAbcam 6002]-ChIP等级(ab6002),1µg/ml(2%BSA) 4-6车道: 抗-Histone H3(三甲基K27)抗体[mAbcam 6002]-ChIP等级(ab6002),1µg/ml(3%牛奶) 1号和4号车道: HeLa(人上皮癌细胞系)核裂解物 2号和5号车道: EED-/-小鼠ES全细胞裂解液 3号和6号车道: WT小鼠ES全细胞裂解液 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 预先吸附的山羊抗小鼠IgG H&L(HRP)( 约97040 )稀释1/50000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 15千Da 观察到的频带大小: 17千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 12分钟 该印迹是在MES缓冲系统下使用4-12%双三凝胶生成的。 凝胶在200V下运行35分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后使用2%牛血清白蛋白(1-3道)和3%牛奶(4-6道)将膜封闭一小时,然后在4°C下与ab6002孵育过夜。 使用与HRP结合的抗鼠抗体检测抗体结合,并使用ECL显影液进行可视化 约133406 . -
ab6002染色HeLa细胞的ICC/IF图像。 将细胞固定在4%PFA中(10分钟),然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1小时,以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。 然后将细胞与抗体(ab6002,5µg/ml)在+4°C下孵育过夜。 二级抗体(绿色)为Alexa Fluor®488山羊抗鼠IgG(H+L),以1/1000稀释度使用1h。 Alexa Fluor®594 WGA用于在1/200稀释度下标记质膜(红色)1小时。 采用DAPI对浓度为1.43µM的细胞核(蓝色)进行染色。 该抗体在4%PFA固定(10分钟)的Hek293、HepG2和MCF7细胞中以5µg/ml的浓度产生阳性结果,在100%甲醇固定(5分钟)的HeLa、Hek293、HepG2和MCF7细胞中以5µg/ml的浓度产生阳性结果。 -
从K562细胞中制备染色质。 用甲醛固定细胞10分钟。用GATA1抗体作为阳性对照,用兔IgG作为阴性对照。 在4°C下,在免疫沉淀稀释缓冲液中与一级抗体孵育16小时。 实时PCR定量免疫沉淀DNA。
实验方案
数据表及文件
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文献 (908)
张H 等人。 m6A甲基转移酶METTL3诱导的lncRNA SNHG17通过表观遗传抑制LATS2表达促进肺腺癌吉非替尼耐药。 细胞死亡病 13:657 (2022). 炸薯条 ; 人类 . 公共医学:35902569 叶J 等人。 长非编码RNA FOXP4-AS1通过EZH2的募集介导H3K27me3下调ZC3H12D,从而促进肝癌细胞的生物学功能。 细胞生物毒素 38:1047-1062 (2022). 公共医学:34545456 王Z 等人。 LncRNA NEAT1通过对神经胶质细胞自噬相关基因表达的表观遗传调控诱导自噬。 J细胞生理学 237:824-832 (2022). 公共医学:34402054 法比安·莫拉莱斯E 等人。 染色体区域9和22的大规模拓扑破坏与CML治疗无反应有关。 国际癌症杂志 150:1455-1470 (2022). 公共医学:34913480 Houthaeve G公司 等人。 瞬时核层粘连蛋白A/C吸积有助于从蒸汽纳米泡诱导的质膜渗透中恢复。 细胞分子生命科学 79:23 (2022). 公共医学:34984553