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所以,如果你还记得的话,我用你的HEK293全细胞裂解物猫ab7902作为你的抗ThPOK抗体#ab93922的阳性对照,但没有得到任何条带。你让我再次尝试使用一种新的HRP抗体,因为我使用的是2009年的抗体。因此,我用10µl=20µg的全细胞裂解液和1/500的7C12在5%脱脂牛奶中进行了重新测试,其中HRP是我在西部片(山羊抗鼠IgG HRP cat#715-035-151)当天重新配制的,建议浓度最高为1/10000。然而,尽管MW标记显示转移良好,但我没有看到任何带,可能在>190 kDa时除外,我为PBMC和293F分别在3号和4号通道制造了裂解液。见所附的印迹膜-左手=光印迹-曝光约2分钟。4-20%凝胶的加载方式如下:1) MW标记2) HEK293全细胞裂解物3) PBMC裂解物4) 293F裂解物5) MW标记6) EL4裂解物右侧过度暴露的斑点是当我在TBST中用2%的BSA封闭时,使用在block 1至500中稀释的抗体,使用生物素抗小鼠Jackson Cat#115-066-146,以及使用SA-HRP和ECL。该斑点来自用于上述斑点的另一半凝胶的转移,加载如下:7) MW标记8) HEK293全细胞裂解物9) MW标记10) PBMC裂解物11) 293F裂解物12) EL4裂解物如果你参考“光照”附件,你会发现即使使用生物素-SA扩增,我也没有为你的裂解液得到任何带。当我在斑点上使用我们的奇特成像仪时,我看到了你的裂解液在60kDa和85kDa之间的一些条带,但这只是生物素链霉亲和素的条带,并且包括EL4通道在内的所有通道都有多条条带(这是一种小鼠细胞系,所以推测小鼠抗体不会对小鼠蛋白反应),正如你所见,这并不是很令人信服。因此,我很高兴能同时获得抗体和细胞裂解物,因为它们的表现并不像预期的那样。更重要的是,如果你有任何想法能帮助我找到一种对西方国家有效的抗人ThPOK抗体,如果我能实现我的梦想,我将不胜感激!
Abcam社区
已验证客户
2012年10月17日被问及
感谢您的留言和提供更多信息。 我很遗憾听到所提出的建议并没有改善这次会议的结果。非常感谢您在这些实验上花费的时间,我想提供退款或贷记单作为补偿(前提是产品是在联系我们的最后180天内购买的)。为了安排这一点,如果您能确认您的订单号或PO以及购买这些抗体和裂解物的日期,我将不胜感激? 我们认为,任何在WB中测试过ThPOK的产品都应符合数据表中的规定,这也是我们提供Abpromise保证的原因。我们确实有其他产品在WB中进行了测试,但不幸的是,这些产品都没有在FACS中进行过测试。当选择在这两种应用中都能发挥最佳作用的产品时,我建议使用在ICC、IHC或IP以及Western blot中测试过的产品。在WB和FACS中表现最好的两种产品可能是:AB70991型https://www.abcam.com/ThPok-antibody-ab70991.htmlAB23388型https://www.abcam.com/ThPok-antibody-ab2388.html感谢您的持续合作。我期待着收到您的详细信息,了解您希望如何继续。
回复于 2012年10月17日