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该客户购买了ab96885(山羊抗兔IgG H&L(DyLight®594)二级抗体)、ab96871(山羊抗鼠IgG H&L(DyLight®488)二级血清),并多次进行ICC。该客户表示,当她想观察FITC荧光时,她会观察PE荧光,但当她想观测PE荧光时,这种状态不会发生,因此,她想请您帮忙找出任何可能的问题,并帮助她修改实验步骤,你能给她提些建议吗? 我在这封信中附上了图片和她的实验步骤如下: 1) 订单详细信息: 批号:ab96885--gr46891-6和ab96871--gr50260-4 邮政编码:1028918 Abcam产品代码:ab96885,ab96871 抗体储存条件(温度/重组等):4℃ 2) 请描述问题(高背景、非特定信号等)。 当我想观察FITC荧光时,我可以观察PE荧光 3) 您用什么材料在IHC/ICC中测试抗体? 物种:1X PBS中1%BSA 什么是细胞系或组织:巩膜细胞 4) 样品制备: •4%PFA/福尔马林固定 培养中的细胞 样品制备: 阳性对照: 阴性对照: 5) 固定步骤 是或否:是 如果是,固定剂和浓度:4%PFA/福尔马林固定 固定时间:5min 固定温度:R.T。 6) 抗原提取方法(包括时间、温度等): 相对湿度60分钟 7) 渗透方法: 您是否进行了渗透步骤(请详细说明)或在任何稀释缓冲液中添加渗透剂? 渗透剂和浓度: 8) 阻断剂(如BSA、血清…): 浓度:1%BSA 封锁时间:60min 阻塞温度:R.T。 9) 内源性过氧化物酶被阻断? 内源性生物素被阻断? 10) 初级抗体(如果使用了一种以上的抗体,请在“附加说明”中描述): 物种: 反应: 在何种稀释度下测试该抗体:1:50⁄250 •稀释缓冲液:1xPBS中的1%BSA 培养时间:60分钟 培养温度:R.T。 清洗步骤(缓冲液、清洗次数):3次,5分钟 11) 二级抗体: 物种: 对以下物种的反应: 在何种稀释度下测试该抗体:1:1000 稀释液缓冲液:1xPBS中的1%BSA 培养时间:60分钟 清洗步骤(缓冲液、清洗次数):3次,5分钟 荧光色素或酶结合物(例如:FITC、HRP、AP、生物素等):FITC和TRITC 你知道你正在经历的问题是否来自中学吗? 12) 信号放大方法(例如:ABC、LSAB、HRP聚合物、TSE): 13) 检测方法(例如:DAB、BCIP/NBT等): 14) 你进行了多少次染色?2 你每次都获得相同的结果吗?对 你改变了哪些步骤来尝试优化这种抗体的使用? 你能帮这个客户解决这个问题吗? 谢谢你的帮助
Abcam社区
已验证客户
2012年3月13日被问及
感谢您抽出时间填写我们的调查问卷。我很抱歉听到这种抗体没有提供令人满意的结果。 所提供的详细信息将使我们能够调查此案,并为我们监测产品质量提供重要信息。 在回顾了这个案例后,我想提供一些建议,以帮助优化abab96885山羊抗兔IgG H&L(DyLight®594)二级抗体的结果。如果您能确认更多细节,我也将不胜感激:1.你用的是什么样的滤光片或灯?不幸的是,DyLight®488和DyLiight®594确实有重叠:在DyLight®;488光谱中有一点,但在DyLight®594波长中更为重要,这与您的发现相符。请向显微镜制造商咨询其滤镜是否适用于这些染料。2.为了检查ab96885是否损坏,我建议只进行一个主次反应的ICC实验。这样你就可以排除恼人的“流血”。 如果这些建议没有改善结果,请务必让我知道。 如果产品在产品数据表中引用的品种和应用中不起作用(并且在购买后6个月内报告了该问题),我们很乐意提供免费更换、贷记单或退款。 我希望这些信息有帮助,并感谢您的合作。
回复于 2012年3月13日