主要功能和细节
分析类型:基于细胞(定量) 检测方法:荧光法 平台:Microplate阅读器,Fluor。 显微镜,流动细胞。 测定时间:40分钟 样品类型:粘附细胞、悬浮细胞
概述
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产品名称 -
检测方法 荧光 -
样品类型 粘附细胞、悬浮细胞 -
检测类型 基于细胞(定量) -
检测时间 0小时 4000万 -
产品概述 DCFDA-细胞活性氧分析试剂盒/活性氧物种分析试剂盒(ab113851)使用细胞渗透试剂2',7'–二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA,也称为H2DCFDA、DCFH-DA和DCFH)定量评估活细胞样品中的活性氧物种。
DCFDA/H2DCFDA/DCFH-DA/DCFH是一种荧光染料,可测量细胞内的羟基、过氧和其他活性氧物种(ROS)活性。 注意:DCFDA和DCFA也可作为游离分子 约145286 (羧基-DCFDA N-琥珀酰亚胺酯)和 ab145439号 (5(6)-羧基-2',7'-二氯荧光素)。
DCFDA分析方案基于DCFDA/H2DCFDA/DCFH-DA/DCFH在细胞中的扩散。 然后,它被细胞酯酶脱乙酰化为非荧光化合物,随后被活性氧氧化为2',7'-二氯荧光素(DCF)。 DCF具有高荧光性,通过485 nm/535 nm激发/发射的荧光光谱检测。
DCFDA分析方案/ROS分析方案总结(微孔板): -将悬浮细胞收集在试管/种子中,并将粘附细胞附着在96-well板上 -缓冲液冲洗 -用DCFDA染色30分钟(悬浮液)/45分钟(粘附物),用缓冲液清洗 -如果是悬浮细胞,转移到微孔板 -用微孔板阅读器分析
DCFDA分析方案/ROS分析方案总结(流式细胞术): -收集试管中的细胞 -用DCFDA染色30分钟(不洗涤) -流式细胞仪分析
DCFDA分析方案/ROS分析方案总结(荧光显微镜): -用缓冲液清洗粘附细胞 -DCFDA染色45分钟 -缓冲液冲洗 -荧光显微镜分析 -维持低光条件以减少光浸出 -
说明 以前称为DCFDA/H2DCFDA-细胞活性氧检测试剂盒。 该试剂盒包含足够的材料,可进行约300次微孔板形式的测量和70次流式细胞术测量(35 mL)。 显微镜下的测量次数取决于实验装置。 该试剂盒与固定样品不兼容。 染色细胞必须进行活体测量。 相关产品 查看 氧化应激标记物和分析指南 ,或完整 代谢分析指南 了解有关代谢产物、代谢酶、线粒体功能和氧化应激的更多分析,以及如何使用平板阅读器检测活细胞中的代谢功能。 对于活性氧物种,最流行的活细胞活性氧测定是DCFDA测定ab113851(绿色)。 替代ROS分析有橙色可选( 大约186028年 ),红色( 公元186027年 )和深红色( 大约186029年 ). 约238535 用于测量生物流体、培养上清液和细胞裂解液中的活性氧。 对于旨在区分活性氧、超氧化物和活性氮物种的分析:使用 约139476 ; 测定活性氧、超氧化物和活性氮的使用 约139473 ; 测定超氧化物的使用 公元219943年 . -
平台 Microplate阅读器,Fluor。 显微镜,流动细胞。
图片
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茴香脑对人骨髓间充质干细胞内过量ROS生成的影响。 hMSCs在2 mM H暴露 2 O(运行) 2 30分钟,在有或无50μM茴香脑的条件下培养2天。 根据制造商的说明,通过使用DCFDA细胞活性氧检测试剂盒对细胞进行染色来测量活性氧。 在200倍放大的荧光显微镜下观察ROS的生成。 -
Kobashigawa等人(Pubmed 25127116)使用DCFDA ROS测定ab113851来研究二甲双胍(Met)治疗阿霉素(Dox)诱导的心脏毒性保护作用的原因。 他们发现,在二甲双胍治疗的H9c2大鼠永生化成心肌细胞中,二甲双胍的治疗降低了Dox(A)诱导的ROS水平。 数值代表平均值±S.D.(n = 4). 结合其他分析,他们提出了这样的假设:Dox诱导ROS表达增加,导致钙水平增加和细胞死亡,Met通过增加AMPK表达来降低这种影响。 -
用50µM叔丁基过氧化氢(tbHP)处理ab113851(DCFDA)标记和未标记的Jurkat细胞,然后用流式细胞仪进行分析。 -
p38 MAPK通路参与HCEC氧化损伤 白色念珠菌 HCEC ROS生成增加 白色念珠菌 p38激活抑制剂SB203580的抑制作用 -
不同处理条件下ab113851对人永生化心肌细胞活性氧水平的分析。 数据是三个不同实验的平均值±SEM。 H2O2 800μM作为阳性对照。 每个时间点的荧光强度值表示为特定t-时间点的值与时间点零点(首次测量)的值之比(t-时间点通过t0)。 简单地说,将细胞(接种密度2.5 x 104个细胞/cm2)置于添加FBS的无酚红培养基中,置于96个黑色孔板上。 24小时后,用1X缓冲液(试剂盒中提供)清洗细胞一次,然后在37°C避光条件下用10μM DFCDA培养细胞30分钟。 孵育后,用PBS洗涤孔,并将细胞暴露于添加有FBS的培养基中,不含酚红。通过使用PerkinElmer VICTOR3在Ex-485和Em-535nm下测量荧光二氯荧光素(DCF)的形成,立即测定ROS的产生。 每30分钟测量一次,持续6小时。 报告每个时间点的荧光强度值。 报告的值是通过特定时间点的荧光与时间0的荧光的比值获得的,该比值在DCFDA孵育后立即测量。 -
Jurkat细胞用DCFDA标记(20µM)或未标记(无),然后根据方案用或不用50µM叔丁基过氧化氢(TBHP)额外培养3小时。 然后在荧光板阅读器上分析细胞。 在每个条件下绘制4个重复的平均+/-标准偏差。 TBHP模拟ROS活性,将DCFDA氧化为荧光DCF。 -
根据方案,用依达比星或阿霉素多次给药处理标记的HL60细胞4小时。 在治疗结束时,在荧光板阅读器(Perking Elmer-Wallac 1420 Victor 2 Multilabel plate reader)中读取细胞的终点。 在每个条件下绘制3个重复的平均+/-标准偏差。 虚线表示用0.5%二甲基亚砜处理的HL60细胞的24个重复的平均值。 -
使用DCFDA分析法测量人类初级关节软骨细胞中的活性氧(ROS)。 细胞用100 µM叔丁基过氧化氢(tBHP)单独使用(4 h) ± 用芹菜素进行预处理。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (606)
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