主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔抗细胞周期蛋白E1单克隆抗体[EP435E] 适用人群:WB、ICC/IF、IP、Flow Cyt(Intra)、IHC-P 敲除已验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [EP435E]至Cyclin E1 -
宿主 兔子 -
特异性 该抗体识别细胞周期蛋白E1。 预计将根据序列分析检测剪接亚型2。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:HAP1和HeLa细胞裂解物,人睾丸和胎盘组织裂解物IP:HeLa淋巴细胞裂解物流式细胞术(内):HeLa和MCF7细胞ICC/IF:HeLa-细胞 IHC-P:人胎盘,人结肠癌,野生型HAP-1。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 长期储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油、0.05%BSA -
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纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP435E型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白
应用
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靶标
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功能 对于控制G1/S(开始)转变时的细胞周期至关重要。 -
组织特异性 在睾丸和胎盘中高度表达。 支气管上皮细胞低水平。 -
序列相似性 属于自行车家族。 细胞周期蛋白E亚家族。 -
翻译后修饰 GSK3对Thr-395和CDK2对Ser-399的磷酸化通过泛素-蛋白酶体途径加速降解。 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 CCNE抗体 Ccne1抗体 CCNE1_人类抗体
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图片
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所有车道: 抗环素E1抗体[EP435E](ab33911),稀释度为1/1000 车道1: 野生型MCF7细胞裂解物 车道2: CCNE1敲除MCF7细胞裂解物 3号车道: HT-29细胞裂解物 车道4: PC-3细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千道尔顿 观察到的频带大小: 47千道尔顿 Western blot:抗-CCNE1抗体[EP435E](ab33911)在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在蛋白质印迹中,ab33911显示与CCNE1特异性结合。 在野生型MCF7细胞裂解液中观察到47 kDa的条带,在CCNE1敲除细胞系中未观察到该大小的信号 约286303 (敲除细胞裂解液AB300211)。 为了生成此图像,分析了野生型和CCNE1敲除MCF7细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗兔IgG H&L 800CW和羊抗鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
石蜡包埋的免疫组织化学分析(A)野生型HAP1(人类慢性粒细胞白血病近单倍体细胞)细胞颗粒(B)CCNE1 KO HAP1细胞颗粒,以1/2000(0.12μg/ml)稀释的ab33911组织标记细胞周期蛋白E1,然后进行即用LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 (A)野生型HAP1细胞颗粒上的核染色,(B)CCNE1 KO HAP1电池颗粒上的无染色。 该切片在室温下与ab33911孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟 -
对石蜡包埋的人结肠癌组织标记细胞周期蛋白E1进行免疫组织化学分析,使用ab33911进行1/2000(0.12μg/ml)稀释,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人结肠癌细胞核染色。 该切片在室温下与ab33911孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟 -
用ab33911对石蜡包埋的人胎盘组织标记细胞周期蛋白E1进行免疫组织化学分析,稀释1/2000(0.12μg/ml),然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人胎盘细胞核染色。 该切片在室温下与ab33911孵育30分钟。 免疫染色在Leica Biosystems BOND®RX仪器上进行。 苏木精复染。 仅二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行热介导抗原检索20分钟 -
所有车道: 抗环素E1抗体[EP435E](ab33911),稀释度为1/1000 车道1: 野生型HAP1细胞裂解物 车道2: CCNE1敲除HAP1细胞裂解物 3号车道: Jurkat细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千道尔顿 观察到的频带大小: 47千道尔顿 Western blot假彩色图像:抗环素E1抗体[EP435E]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负载控制染色,以红色显示。在Western blot中,ab33911被显示为与细胞周期蛋白E1特异结合。 在野生型HAP1细胞裂解液中观察到47 kDa的条带,在CCNE1敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析野生型和CCNE1敲除HAP1细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中的3%牛奶中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗环素E1抗体[EP435E](ab33911),稀释度为1/1000 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: CCNE1(Cyclin E1)敲除HAP1全细胞裂解物 每车道40µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 47千道尔顿 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在47 kDa时观察到ab33911。 红色-装载控制, 约9484 ,在37 kDa下观察到。 ab33911在野生型HAP1细胞中识别CCNE1,因为在CCNE1(Cyclin E1)敲除细胞的预期MW时信号丢失。 在野生型和敲除型细胞中观察到额外的交叉反应带。 对野生型和CCNE1(细胞周期蛋白E1)敲除样品进行SDS-PAGE。 Ab33911和 约9484 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 该图像是使用未纯化的抗体格式生成的。 -
用纯化的ab33911对标记细胞周期蛋白E1(绿色)的HeLa(人宫颈腺癌)细胞进行1/500的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 用4%多聚甲醛固定细胞,并用0.1%Triton X-100渗透。 约150077 ,Alexa Fluor公司 ® 用488-结合羊抗兔IgG(1/1000)作为二级抗体。 细胞核用DAPI(蓝色)复染。 仅二级对照:用PBS代替一级抗体作为阴性对照。 -
车道1: 抗环素E1抗体[EP435E](ab33911),稀释度为1/1000(纯化) 2-3车道: 抗环素E1抗体[EP435E](ab33911),稀释度为1/1000 车道1: HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: 人睾丸裂解物 3号车道: 人胎盘裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔IgG(HRP)与人IgG在1/2000稀释度下具有最小交叉反应性 预测的带宽大小: 47千道尔顿 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 细胞周期蛋白E1在睾丸和胎盘中高度表达,PMID:9840943中对此进行了描述。 阻断/稀释缓冲液:5%NFDM/TBST。 -
用纯化的ab33911在1/30稀释度(10µg/mL)(红色)下对标记细胞周期蛋白E1的HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞)细胞进行细胞内流式细胞术分析。 细胞用4%多聚甲醛固定,用90%甲醇渗透。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488中, 约150077 )第二抗体在1/2000时使用。 同位素对照-兔单克隆IgG(黑色)。 未标记对照-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)。 -
重叠直方图显示用ab33911染色的MCF7细胞(红线)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞,以阻止非特异性蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab33911,1/1000稀释)培养30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150077 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 同型对照抗体(黑线)为兔IgG(单克隆)(0.1µg/1x10 6 电池)在相同条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 该抗体在80%甲醇(5分钟)固定/0.1%PBS-Tween渗透20分钟的MCF7细胞中呈阳性信号。 该图像是使用未纯化的抗体格式生成的。 -
用ab33911在1/500稀释下标记细胞周期蛋白E1的HeLa细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。 细胞固定在多聚甲醛中,并用0.5%Triton X-100在PBS中渗透。在22°C的PBS缓冲液中用ab33911在1/500的温度下染色1小时。 约150081 ,一个 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor ® 488)预吸附二级抗体,以1/200稀释度使用。 DAPI用于复染。 该图像是使用未纯化的抗体格式生成的。 -
ab33911用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)染色HeLa细胞中的Cyclin E1。 细胞用多聚甲醛固定,用0.2%Triton X-100渗透,用2%BSA在室温下封闭45分钟。 样品与一级抗体(PBS中的1/300+2%BSA)在4°C下孵育14小时。 Alexa Fluor公司 ® 用488-结合山羊抗兔IgG多克隆(1/500)作为二级抗体。 该图像是使用未纯化的抗体格式生成的。
数据表及文件
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SDS下载 -
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文献 (121)
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