Your browser does not have JavaScript enabled and some parts of this website will not work without it.
为了使您在Abcam公司官网的浏览体验更顺畅,请使用最新版本的浏览器比如谷歌浏览器
看看我们的BETA网站,看看我们到目前为止做了什么。
搜索和浏览所选产品
通过通常的分销商购买
欢迎光临
您还没有帐户?
定制化产品和商务合作加速您的诊断和治疗项目
定制化产品
与我们成为伙伴
获取研究建议和支持
查看支持中心
一步一步完成您的实验
查看协议
活动说明、摘要提交、演讲者、注册方式及更多信息
查看全球活动安排
查看所有通路
查看交叉通路
技术(解放军)是一种均相免疫组化工具,特异性高,灵敏度强,它结合了酶联免疫吸附试验的特异性和 聚合酶链反应的灵敏度。
该项技术由 弗雷德里克森及其同事于 2002年研发,克服了在试图观察和研究单个蛋白、蛋白间相互作用和翻译后修饰(PTM)(例如磷酸化、乙酰化和糖基化)时产生的问题。
聚乳酸可用于高级蛋白应用和各种样本,例如生物样本、细胞系和新鲜、冷冻或福尔马林固定、石蜡包埋 (全氟乙烯)的组织。该项技术还可以有效阐明细胞在健康和疾病状态下的功能。
该项技术的选择性强是因为它使用了一对 DNA邻位探针,每个探针都由与高亲和力寡核苷酸偶联的特异性抗体(抗体-寡核苷酸)组成,这种抗体可以同时与同一蛋白的不同表位,或某一复合物中的两个蛋白结合,从而将它们转化为 DNA分子,用于下游定量。
邻位连接技术有两种不同的方法,即直接法和间接法,但两种方法都需要使用在不同种属中产生的抗体(参考1)。直接法使用的是Ab–寡核苷酸偶联物,间接法使用的是未修饰的一抗,这些一抗需用二抗 阿布-奥利戈偶联物进行检测。该项技术既可以使用单抗,也可以使用多抗,还可以同时使用单抗和多抗。
图 1直接和间接 解放军技术。直接法使用的是一抗偶联抗体对,间接法使用的是二抗偶联物。
两种方法都会引入额外的“连接器”寡核苷酸,用于识别并与两种Ab–寡核苷酸偶联物的游离端结合,然后被递送至近邻位(相距 30–40纳米)与 DNA连接酶连接。
此酶促连接会将第一个探针的 3' 末端与第二个探针的 5' 末端连接起来,形成独特的目标 DNA报告链(分子),后者是待检测的特定蛋白的替代标志物,包含特定的分子条形码。这些链通过参与滚环扩增 (RCA)使产物扩增,以便进行实时 聚合酶链反应工程量清单
两种方法都会引入额外的“连接器”寡核苷酸,用于识别并与两种 Ab–寡核苷酸偶联物的游离端结合,然后被递送至近邻位(相距 30–40纳米)与 DNA连接酶连接。
此酶促连接会将第一个探针的 3' 末端与第二个探针的 5' 千兆赫DNA报告链(分子),后者是待检测的特定蛋白的替代标志物,包含特定的分子条形码。这些链通过参与滚环扩增 (RCA)使产物扩增,以便进行实时 聚合酶链反应定量。
均相邻位连接技术
均相邻位连接技术适合在少量均相溶液中对低浓度蛋白质分子进行定量,检测灵敏度可达到飞摩尔级。这类 解放军共有三步,不需要洗涤。简单来说就是,将靶抗原与两个邻位探针(3’和 5’)和(约20个基点)一起孵育,两个邻位探针与靶抗原上的相邻表位结合,连接寡核苷酸则与两个探针杂交。通过实时 聚合酶链反应扩增、检测和定量生成的 DNA分子。
以摩尔为单位过量添加连接器寡核苷酸,阻止自由邻位探针进一步杂交,从而降低背景噪音。均相 解放军还有一个优势是不需要用固相载体来固定靶蛋白。
固相邻位连接技术
固相邻位连接技术是均相 解放军的一种替代方法,利用捕获抗体将靶蛋白固定在固相上,具有一定的优势,例如可以用来研究大型样本集。样本与捕获抗体结合,并与邻位探针一起孵育。因此,靶抗原夹在邻位探针和捕获抗体之间。
洗涤后,进行连接和定量 聚合酶链式反应(qPCR)与其他固相检测(如 ELISA)相比,固相 解放军的优势在于它不需要大量严谨的洗涤步骤。将蛋白固定在固相载体上有助于纯化和浓缩样本,尤其是那些含有可能抑制连接或扩增的成分的样本,或者分析物浓度极低的样本。洗涤步骤还可以在连接之前去除未结合的探针,防止探针发生非特异性连接。
原位 邻位连接技术
原位解放军是第三种由邻位介导的检测方法,可以检测和观察由固定细胞和组织切片上表达的靶蛋白/蛋白-蛋白复合物。除了使用适合方案所用抗体的固定剂来固定细胞或组织,有时还需要透化细胞和组织。如有需要,随后必须进行抗原修复和抗体特异性封闭。
邻位连接技术的优势:
邻位连接技术的限制:
为了解决抗体与寡核苷酸偶联的复杂操作问题,我们提供了一种寡核苷酸偶联试剂盒,这种试剂盒使用方便,可快速偶联抗体与寡核苷酸,材料回收率高,清洁程序出色。该试剂盒反应快、使用简单,克服了标准偶联法耗时、实验方案冗长的问题。
特性和优势:
连接化学发生在 5' 和 3' 末端,因此可以与其他修饰结合。
图 2寡核苷酸偶联过程。Ab–寡核苷酸偶联方案包括三个主要步骤:激活抗体和寡核苷酸,然后脱盐,接着将两者混合并孵育过夜。如果用于终端应用时,需要去除未结合的寡核苷酸,可以次日早上进行。操作完成后,就可以随时使用偶联物了。
寡核苷酸偶联试剂盒的主要应用:
免疫 PCR(iPCR)、邻位连接技术(解放军)、检测(ECPA)、侧向层析。
如需了解有关该产品的更多信息,请单击此处。我们拥有专业的技术支持团队,很乐意为您提供帮助,点击此处联系我们。